登录| 注册

丁香客

选择模板

更多 最新动态

  • 灯光下的生命
    灯光下的生命  回复了帖子 WB显影老是有杂带是为什么 469天前
    有文献,但是我内参出的还可以,挺清晰,没杂带,裂解的话有时候会有一点白色絮状物在里面,不知道这样是不是不充分?
  • 灯光下的生命
    灯光下的生命  回复了帖子 WB显影老是有杂带是为什么 469天前
    不好意思,最近有点忙,没看消息😂每个样品我取了50mg组织,置于EP管中,用PBS冲洗组织,用剪刀将组织块尽量剪碎;加单去污剂裂解液RIPA(含PMSF,其中RIPA:PMSF=100:1, 500μl裂解液)于EP管中,静置30min,超声(soniprep 150型超声波发生器,4D安培,5s/次,间隙10s,反复3-5次)进行匀浆(置于冰上)重复2-3次使组织尽量破碎。裂解30 min后,然后在4℃下12000 r离心5 min ,取上清分装于离心管中,蛋白浓度配平后取上清液用PBS中和浓度,上清液和PBS的量都由电脑配平得来,我一般每次做7个样,然后加入5XSDS 上样缓冲液(蛋白量:缓冲液量=4:1μl),于沸水中煮5 min使蛋白变性。
  • 灯光下的生命
    灯光下的生命  回复了帖子 【求助】有关SIRT1的分子量 477天前
    我也是在110kd左右有2条带,不知道为什么
  • 灯光下的生命
    灯光下的生命  发布了新帖 WB显影老是有杂带是为什么 478天前

    一抗最近换了abcam的抗体,二抗也是,封闭液用的百分之5的脱脂奶粉封闭1h,做了好多次了,老是有杂带

  • 灯光下的生命
    灯光下的生命  : 有认证,有身份。我是医生,我通过了丁香园认证,拥有了专属身份标识和查看病例帖的特权,还得到了 30 丁当的奖励。你是医务工作者吗?一起来认证吧,首次通过丁香园认证还能免费获得 6 个月用药助手专业版会员http://dxy.me/MNZna2

关于我们|联系我们|版权声明|资格证书|丁香志|加盟丁香园|友情链接 丁香园旗下网站: 丁香园|丁香通| 人才|会议|药学|博客