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  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 请教:HL-60/A细胞应选择哪种转染方法? 9小时前
    HL-60倒还没接触到,目前只做过A549细胞转染,最开始用的Lipo2000,做下来细胞死忙的有点多,后来换了我师兄推荐的RFect,细胞飘起来的倒是没有以前多了,但是整个实验过程中因为细胞铺板密度的略微差别,关于试剂用量的摸索反反复复了不少时间
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 本人做人血浆的microRNA,标本怎么采集,保存? 11天前
    我个人认为是抗凝管,尽快分离血浆,立刻液氮速度10秒以上至完全凝固,转移至-80℃冰箱保存,我们实验室一般使用保存在冰箱中的血浆样品进行BIOG CFRNA EASY KIT方法提取miRNA,同时前面我说的能把样品尽量好的保存,方便进行下后面游的高通量测序或者低通量实验。
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 全球首次系统性检测高血压病人血浆中microRNA 11天前
    血浆中RNA含量很低不容易提取,听说我师兄实验室最近在尝试BIOG cfRNA EASY KIT离心法提取大鼠血浆中的RNA,不知道实验结果的OD值有多少,我们现在的实验很多是为了提取血浆中的RNA进行研究对一些疾病的治疗提供了很多有价值的线索关重要。
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 Jurkat细胞电转染 12天前
    电转是通过高强度的电场作用,瞬时提高细胞膜的通透性,从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将核苷酸、DNA 与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。电转化相对其它物理和化学转化方法,是一种有价值和有效的替代方法。我们实验室用biodai做细胞的瞬时转染,普通的贴壁细胞转染阳性率可以到85%左右,电击会对细胞造成一定程度的伤害,在转染试剂的选择上要注意,应选择具有细胞膜修复成分的电转染试剂,可将电击对细胞的损伤降到最低。
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 肺癌细胞A549转染siRNA用lipo2000能转进去吗? 13天前
    A549算是比较好转的细胞了,我们从合成公司买了siRNA,BIODAI转染的A549细胞,转染效率差不多有90%,整个过程没有换培养液。你用Invitrogen的Lipo2000问题也不大,只是要注意转染后更换培养液,Lipo系列的细胞毒性还是有点大的
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 哪种乳腺癌细胞有侵袭转移能力 14天前
    我觉得应该先在六孔板里转染然后再传代到24孔板的transwell小室中检测,通常先需要细胞的培养,然后设计目标siRNA再合成,一般我们实验室用biodai做完转染后都会在6h小时先观察荧光情况。
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 利用脂质体对THP-1细胞转染 18天前
    THP-1细胞全称是单核巨噬细胞,较普通的贴壁细胞转染的难度会大一些,为了提高转染效率,最好对转染条件进行优化,建议使用24孔培养板,调整 siRNA与RFectSP的用量,siRNA用量在6-60 pmol (final concentration 10- 100 nM)之间调整,如果有必要可以先做个预实验
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 从唾液中提取微生物DNA做16S测序,唾液收集怎么弄! 18天前
    采集步骤 ①在采集唾液样本前30分钟内,用饮用水将口腔内的杂物洗漱干净。 ②用舌尖抵往上颚或下颚齿根以富集唾液,向biodai采集漏斗中轻轻吐入唾液,直至液体唾液(非气泡)达到1ml刻度线高度。 ③手持唾液采集管,令其处于直立,并用另一只手协助旋开细胞保存液的管盖。 ④将细胞保存液缓缓倒入采集漏斗口内,保持直立使保存液完全流入采集管中,使页面达到2ml左右刻度线。 ⑤保持采集管处于直立状态,小心从采集管漏斗上旋下采集管。 ⑥用收集管的蓝色小盖子将采集管拧紧。 ⑦上下颠倒采集管5次,使细胞保存液充分混匀,丢弃使用过的采集漏斗及细胞保存液管。
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 土壤和植物DNA提取 19天前
    磁珠法核酸提取具有传统DNA提取方法无法比拟的优势:能够实现自动化、大批量操作,目前已有96孔的核酸自动提取仪,用一个样品的提取时间即可实现对96个样品的处理,符合生物学高通量的操作要求,使得传染性疾病爆发时能够进行快速及时的应对,这一特点使得传统方法望尘莫及;操作简单、用时短,我们实验室用的BIODAI磁珠提取法整个提取流程只有四步,大多可以在30分钟内完成;安全无毒,不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂,对实验操作人员的伤害小
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 磁珠法进行全血样本提取后,OD260/280异常 24天前
    楼主这种情况可能是RAN降解所导致的,也有可能是磁珠吸附了其他的杂质,建议减少单次处理的样本量或者减少干燥时间,听我师姐说他们实验室用的BIOG Blood DNA Mag-B可以直接从全血中提取DNA,不需先从全血中分离白细胞、淋巴细胞等有核细胞,我个人觉得这样操作就更加方便了
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 siRNA转染原代细胞效率问题? 33天前
    转染后4-6小时观察到的荧光只能作为参考,我们实验室用BIODAI做完siRNA转染后一般选择48h小时后用qPCR水平检测
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 请问siRNA只能在细胞系上做吗?能否在原代细胞上做呢? 33天前
    原代细胞一般是从活体组织中获取的细胞,细胞体系比较复杂,不稳定,原代培养具有两个特点接触抑制和贴壁生长,原代细胞的转染要比一般传代的细胞难很多,BIODAI可以转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA。原代细胞不容易转,而脂质体转染效率不高,所以我很担心您实验的成功率。
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 微量RNA提取 35天前
    一般微量细胞、组织指的是冰冻切片、脱落细胞等样本,本身样本的获得就很不容易,样本量很少,想要获得理想的DNA就比较困难,师姐跟我推荐BIOG Microdose Cell RNA Mag-B Ki,她说在20分钟左右完成提取过程,操作相对比较方便
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 快速提取人细胞DNA的方法? 49天前
    我们用的BIOG可以在半小时内获得基因组DNA,比磁珠法提取到的DNA纯度要高,且单次处理样本体积可达0.2-1ml
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 全血DNA的提取 63天前
    应该每个厂家的叫法有略微的区别,我用的BIOAI里面没有你们说的结合液CB
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 siRNA 转染 H9C2细胞 67天前
    能不能用G418筛选是根据你的质粒组成是否有neo抗性基因(新霉素),除了Amp+抗性。293作为常用的工程细胞,适合稳定株的筛选,CHO可能并不大好。当然,每种细胞应该都可以筛选稳定株,只是效果好和差吧,估计!或许就换一下其他质粒转染的,DeofectEU可以试试。
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 求助:把化学合成的siRNA用Lipo2000转染进293T细胞! 67天前
    一般实验设置实验空白组,实验组和阴性对照组,筛选的药物一定是对干扰组有作用,但是对NC组没有影响的,不然结果就不好分析了,我们课题组一般是用BIODAI方法,用的合成公司的siRNA,一般都是要在NC组上面做预实验
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 siRNA转染的几个问题,急! 82天前
    为了能在使用时有较好的转染效果,第一次使用建议使用24孔板做,每孔2ul BIODAI转染试剂,将最佳转染条件(siRNA与转染试剂的用量、比例)放大到对应的孔板;设置siRNA终浓度10nM,30nM,50nM,100nM四个梯度,每个梯度建议做2-3个复孔,避免实验误差。
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 hela细胞转染就死掉了呢??? 84天前
    建议重新培养细胞后再做转染实验,楼主是用什么试剂做的?虽然有些试剂siRNA和质粒都能转,但可能质粒的转染效率会远低于siRNA,我们隔壁实验室用DeofectEU  转染的plasmid 
  • 滨湖小虾米
    滨湖小虾米  回复了帖子 一个关于化学合成siRAN的问题 91天前
    应该不可以吧,建议还是直接从合成公司购买,,用的DMEM培养液,用24孔板做,每孔2ul转染试剂,设置RFect 2ul,3ul,4ul三个梯度,每个梯度做2个复孔,siRNA 和试剂的比例1:2。

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