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  • 波儿小芒
    波儿小芒  回复了帖子 miRNA与靶基因 1天前
    不是的,一个miRNA可能的靶基因有多个,不同细胞内的表达谱不一样,亲和倾向性也不一样。例如一个miRNA可能调控A、B、C,在hela细胞里,该miRNA发挥的最有意义调控是其能与A亲和,但是到了A549里,就不一定了,不是说到了A549细胞内该miRNA不跟A亲和,而是这种亲和不是最有生物意义的。
  • 波儿小芒
    波儿小芒  回复了帖子 【公告】每月细胞版风云战友奖励专用帖 2天前
    多谢版主,继续跟帖。
  • 波儿小芒
    波儿小芒  回复了帖子 退修意见中审稿老师认为我pcr和wb内参不一致让我解释 2天前
    可以说明问题,如果用实验数据来证明的话,通常需要pcr和wb联合证明。只有从转录层面和翻译层面都没有影响才算完整。
  • 波儿小芒
    波儿小芒  的帖子被加了1分 2天前

    回复:求助个细胞冻存相关的问题,多谢多谢!

    这个是要计算比率的,组织冻存的确会死亡很多细胞,甚至有些冻存失败的会导致很大的异质性现象,但是,把组织放到宏观角度去看,整体角度去看,死亡的毕竟算是少数,能够有代表性的区域性组织块满足需要就可以了。细胞冻存过程中也是会有5-15%的细胞死亡的,但是只要剩余的细胞良好,能够满足我们...
  • 波儿小芒
    波儿小芒  回复了帖子 这种细胞还可以继续传代吗 2天前
    那个没事儿,最多就是黑胶虫,即使有,不必在意,对于体外实验的结果,没有任何本质性影响。而且随着细胞密度的增大,就会自己消除了。
  • 波儿小芒
    波儿小芒  的帖子被加了1分 7天前

    回复:TGFb1互作蛋白的筛选

    互作蛋白是两个蛋白具有相互作用,类似于朋友的关系,哥俩好,但是不一定存在调控关系,就是单纯的关系好,但是谁也管不着谁。(这个说法就是帮助你理解,生物体内也存在非常多的Binding 蛋白同时存在调控关系)你说的第二种情况,先用TGFb1的重组蛋白进行刺激,这个刺激我理解就是暴露或...
  • 波儿小芒
    波儿小芒  的帖子被加了1分 7天前

    回复:细胞污染

    这个看起来更像是细胞碎片,通过图片,可以看到你细胞状态不是很好。建议如下操作:1、暂时不要传代,让细胞自由生长,细胞涨至90%以上密度时,进行传代。培养过程中,略微多补加一些FBS,FBS总体终浓度15%即可。2、如果漂浮的细胞不是特别多,尽量不要换液,如果漂浮细胞很多,换液之前...
  • 波儿小芒
    波儿小芒  的帖子被加了1分 7天前

    回复:western blot 一种抗体显出两根条带

    比较正常,抗体的特异性、体内转录本多样性,蛋白磷酸化的比率,都会导致这样的现象,没关系的,只要有目的带即可,保留原始图片,同时paper里面剪裁一下即可。但一定记得保留原始图,很多杂志都需要原始数据。
  • 波儿小芒
    波儿小芒  回复了帖子 western blot 一种抗体显出两根条带 8天前
    比较正常,抗体的特异性、体内转录本多样性,蛋白磷酸化的比率,都会导致这样的现象,没关系的,只要有目的带即可,保留原始图片,同时paper里面剪裁一下即可。但一定记得保留原始图,很多杂志都需要原始数据。
  • 波儿小芒
    波儿小芒  回复了帖子 求问求问 8天前
    完全可以,跟普通细胞株构建方式差不多,293比较好转染,所以瞬时表达量会比较高,但是,但是,但是,往往筛选出的细胞株,表达量不会那么强烈。表达丰度太高的细胞通常会有些副作用,慢慢就死掉了。
  • 波儿小芒
    波儿小芒  的帖子被加了1分 8天前

    回复:请教蛋白质相互作用

    一般不用都做,我建议做一个IP,IP的正反都要做。A pulldown B,然后B pulldown A。做完IP之后,还可以做一个细胞内的共定位,拍个免疫荧光图就可以了。研究蛋白互作本身这个技术很常规,最最核心的内容在于阐述这两个蛋白互作带来的生理意义,这个比较难一些,也是文章...
  • 波儿小芒
    波儿小芒  回复了帖子 请问抑菌抗菌类产品对细胞有无毒害作用 10天前
    不需要的,培养基保存相对比较粗放,放置于4-8度完全ok的。
  • 波儿小芒
    波儿小芒  的帖子被加了1分 19天前

    回复:transwell实验问题

    个人理解,如果考察的是趋化因子,那么上下层的FBS含量应该一致。我平时做的时候主要考察癌细胞的侵袭能力,所以,上下层的FBS浓度不一样,就是为了给细胞提供养料浓度差。你这个实验貌似养料不是考察因素,所以我理解中上下层都应该加入FBS,浓度高于5%即可。Transwell规格,建议...
  • 波儿小芒
    波儿小芒  的帖子被加了1分 19天前

    回复:我的细胞怎么了

    林深时见鹿PE8H第三张照的是瓶子的边上,细胞多些,平底其余大部分细胞状态都不太好,做过把消化过的空瓶子,有残留类似污染的东西还有很多粘在瓶底上面,继续培养,隔天看会变多变多了以后仍然是贴壁状态吗?如果是,你拿双抗原液对细胞进行洗涤,洗涤2-3次,然后更换新的培养基(双抗比率调节...
  • 波儿小芒
    波儿小芒  的帖子被加了1分 19天前

    回复:免疫共沉淀结果

    我来说一下我的看法,首先哈,InPut组应该放总蛋白提取液,目的蛋白进行WB的时候,应该是能看到阳性带的。然后Input总蛋白要进行IP,IP之后分为IgG组和Tcf,然后进行目的蛋白(b-cat)WB实验,若存在Interaction,则Tcf组能看到b-cat条带。IgG组是...
  • 波儿小芒
    波儿小芒  回复了帖子 CTVT细胞 20天前
    感谢邀请,但是很遗憾该细胞我并未培养过,祝愿好运
  • 波儿小芒
    波儿小芒  的帖子被加了1分 20天前

    回复:关于质粒与感受态大肠杆菌的研究

    本人正在研究一个毒性蛋白,已在质粒中成功表达,也转染到了大肠杆菌中,分离这个毒性蛋白太费力了。请问各位有直接把质粒或这大肠杆菌就直接灌到动物身上来进行研究的吗?或者有可参考的idea的吗?有的话,麻烦也提供一下参考文献!这个方案是完全不可行的,首先,大肠杆菌表达需要的是原核启动子...
  • 波儿小芒
    波儿小芒  回复了帖子 看文章的时候经常看到有些文章用两个不同的siRNA序列沉默目的基因请教下原因 21天前
    您好,表型你可以理解为性状,比方说有人把我揍了一顿,我体现出来的表型就是步履蹒跚。siRNA也一样,比方说你怀疑基因A的敲低,可以使某个癌细胞表现出张牙舞爪的生长态势,那么你要针对这个基因A选择两个siRNA,发现这两个siRNA都可以使基因A表达下降,同时细胞都表现出了张牙舞爪的姿态。然后,你可以得到结论:基因A的下调会使目的细胞呈现张牙舞爪的姿态!这个张牙舞爪的姿态就是表型
  • 波儿小芒
    波儿小芒  的帖子被加了1分 25天前

    回复:看大家有什么好的方法

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  • 波儿小芒
    波儿小芒  : 有认证,有身份。我是医生,我通过了医师认证,拥有了专属身份标识和查看病例帖的特权,还得到了 30 丁当的奖励。你是医务工作者吗?一起来认证吧,首次通过医师认证还能免费获得 1 个月用药助手专业版会员https://dxy.me/MNZna2

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