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  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 敢不敢暴一下自己你的规培工资 127天前
    请问前辈是福建哪里的规培呢
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 做外泌体CD63的western出现了一些问题 182天前
    那可能和目的分子没啥关系了,你看看提蛋白、电泳或敷抗体过程是不是有什么操作失误
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 WB条带 185天前
    1、蛋白问题,可能是①细胞提取的蛋白浓度太低或提取蛋白方法有误(个人认为此种可能性大,但如果内参显示正常的话可以排除提蛋白的问题,有没有内参的条带图看看?);②转膜时间过短,蛋白未均匀吸附;③电泳液或转膜液过期导致效率下降;③操作粗暴,把蛋白面的蛋白刮落;2、抗体问题,可能是①浓度太低;②孵育时间过短;③抗体过期;④孵育时蛋白面朝下导致孵育不全;⑤孵育盒内抗体容积太少;3、曝光问题,可能是①曝光液配制比例错误;②曝光液没有均匀滴在膜上,导致条带灰度不均;③曝光时间过长导致膜上曝光液流失;④曝光板没有水平摆放;总的来说还是看看内参的条带图是否正常,首先排除蛋白的问题。
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 为什么曝光的条带位置会变 187天前
    1、首先看内参,如果内参没有问题,说明蛋白提取的样本应该还是可以的。如果你的内参有问题,建议重新提取蛋白重复实验试试,排除一下蛋白提取问题。2、抗体是否足够特异?有一些兔多克隆抗体,如果特异性较差也会对附近位置的其他分子发生少量反应因此显色。3、如果排除提蛋白和抗体问题,那还有可能是你的目的分子发生了翻译后修饰,比如说这个分子的蛋白发生了剪切修饰,但它仍保留原来的部分基团能和目的分子的抗体发生反应,所以它也会在分子量稍微小一些的位置出现显色,因此就会有两个条带,并且位置差的不远。像你这个图的话,如果能排除第一个可能,而且条带相对于marker的位置变化是出现在分子量稍小的位置时,我考虑翻译后修饰的可能性大。   
  • 此男子有毒
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 鱼类肠道HE切片,求大佬指点 191天前
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  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 条带弥散,深浅不一 191天前
    1、蛋白问题,可能是①细胞提取的蛋白浓度太低或提取蛋白方法有误(个人认为此种可能性大,但如果actin显示正常的话可以排除提蛋白的问题,有没有actin的条带图看看?);②转膜时间过短,蛋白未吸附;③电泳液或转膜液过期导致效率下降;③操作粗暴,把蛋白面的蛋白刮落;2、抗体问题,可能是①浓度太低;②孵育时间过短;③抗体过期;④孵育时蛋白面朝下导致孵育不全;⑤孵育盒内抗体容积太少;3、曝光问题,可能是①曝光液配制比例错误;②曝光液没有均匀滴在膜上,导致条带灰度不均;③曝光时间过长导致膜上曝光液流失;④曝光板没有水平摆放;个人认为蛋白提取问题和配胶问题要首先排除。
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 求对Western Blot条带灰度进行分析的软件 191天前
    邮箱给我,附件太大无法上传
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 镀银染色结果分析 193天前
    上图,具体问题具体分析。
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 PD-L1的Western Blot结果分析 194天前
    1、如果内参没有问题,说明蛋白提取的样本应该还是可以的。如果你的内参有问题,建议重新提取蛋白重复实验试试,排除一下蛋白提取问题。2、抗体是否足够特异?有一些兔多克隆抗体,如果特异性较差也会对附近位置的其他分子发生少量反应因此显色。另外我们实验室抗体都是放在-20℃的,避免过期。3、如果排除提蛋白和抗体问题,那还有可能是你的目的分子发生了翻译后修饰,比如说这个分子的蛋白发生了剪切修饰,但它仍保留原来的部分基团能和目的分子的抗体发生反应,所以它也会在分子量稍微小一些的位置出现显色,因此就会有两个条带,并且位置差的不远。如果是第3,只要你想要的大趋势做得出来,这种隐约有一些杂带不会影响结果的,反而显得你的实验结果比较真实,因为翻译后修饰是确实存在的。
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 CCK8检测细胞增殖实验 197天前
    dxy_r3vhgr44 好的,谢谢。细胞及处理都是一样的,就是随着培养时间的增加,细胞数会越来越多。24h,48h,72h,96小时检测之后,OD值从0.4到2.0,这样是可以的吗? 还想问一个问题,就是平行孔之间一般差多少表示平行性比较好呢?1、细胞数会越来越多。24h,48h,72h,96小时检测之后,OD值从0.4到2.0,这样是可以的吗?可以,细胞越多数值就会越大。2、平行孔之间一般差多少表示平行性比较好呢?副孔之间差值当然越小越好,表示孔间差异较小。具体差值无明确规定,当然肯定要远小于你的组间差异。我自己做过差异小的时候只差了小数点后三位数,差异大的时候小数点后一两位吧,因为组间差异很大,所以副孔之间差异都算小的了。
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 每月细胞版风云战友奖励专用帖 197天前
    四月得分第二,谢谢版主
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 WB条带爆不出以及曝出白光条带的疑问 198天前
    根据某些条带出现过曝情况来看,如果同一个膜上有一个曝光度过高的话,其他稍低的就很容易曝不出来,我遇到这种情况就会把膜小心剪开,高曝的单独曝,消除了高曝的影响,别的微量蛋白无法曝光的就会慢慢曝出来了。
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 免疫组化图片如何显示倍数图片 198天前
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  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 请教:看文献经常遇到不懂的概念和统计作图,该咋办? 199天前
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  • 此男子有毒
    此男子有毒  的帖子被加了1分 200天前

    回复:请教:看文献经常遇到不懂的概念和统计作图,该咋办?

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  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 求助!有关原代肝癌细胞的培养的问题,求助园子里的大佬!! 202天前
    1、你原代提取细胞培养密度太大了,培养基跟不上的话细胞状态肯定会很差,后面会死亡什么的也是必然趋势啊。2、血细胞大部分是悬浮细胞,肝癌细胞是贴壁细胞,正常肝癌细胞贴壁后,常规换液时去除悬浮的血细胞就可以区分二者了。3、肝癌细胞在死亡的情况下失去贴壁能力,因此培养过程中贴壁细胞越来越少说明活细胞也越来越少了。4、你的图里背景很脏,细胞形状不规则,状态较差,碎片可能是肝癌细胞裂解形成的,若继续这样极有可能污染。胞质里出现小颗粒,可能是凋亡导致细胞器崩解。5、肝癌细胞没有纤维细胞那么细长,没有巨噬细胞那么肥大。至于是不是肝星状细胞的话建议你多看看文献,我个人认为后面两个图里这么细长的细胞如果是星状细胞的话可能状态也不是很好了。6、离心换液的时候注意离心力不要太大,离心不要太久,吹打细胞不要次数太多
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 重组猪IL-2活性单位换算 202天前
    http://dxy.me/u75JAo之前园子里的前辈有给出这种单位换算方法,取决于不同活性物质的ED值。
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 western做ACE 202天前
    上图看看,具体问题具体分析。
  • 此男子有毒
    此男子有毒  回复了帖子 请教关于肠道切片绒毛长度,隐窝深度,肠粘膜厚度,杯状细胞等问题。 204天前
    上面黑色箭头指的部位是腺体基膜后的间质,可见深紫色核一圈环状排列围绕腺体。下面黑色箭头指的部位是腺体,有白色空腔,是分泌肠液的结构。有白色空腔、空泡的结构是黏膜上皮。绒毛就是粘膜上皮往肠腔伸出的指状结构,你片子里基本都是明显的绒毛结构。隐窝不太好找,一般是在各个绒毛根部,如果说绒毛是粘膜上皮的突起部分,那隐窝就是上皮下陷的底部。杯状细胞更简单了,肠道的特征性细胞,在第二张图里明显很多,可以看到一个个绒毛的边缘有一些细胞里面有圆形空白,是胞膜下的粘液在切片后形成的空洞。放大倍数看的话,白色膨起的上部和细胞较窄的深色部分,就像高脚杯一样,所以叫杯状细胞。另外,这些东西在医学本科一年级教材组织胚胎学书上均可查到。

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