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  • 戒指杀手
    戒指杀手  发布了新帖 IND,NDA,ANDA区别 192天前

    FDA新药审评程序包括新药临床试验申请IND申报和新药申请NDA申报两个过程,申请人在完成新药临床前研究后,便可向FDA提出IND申请,若FDA在收到后30天内未提出反对意见,申请人便可自行开展新药临床研究。仿制药申请通常被认为是简短的,因为这类申请不需要提供临床前动物和临床人体数据来证明其安全性和有效性。下面来看一下什么是IND申报、NDA申报和ANDA申报?1、IND申报IND主要目的是提供足够信息来证明药品在人体进行试验是安全的,以及证明针对研究目的的临床方案设计是合理的。IND主要包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床试验申请,其中Ⅰ、Ⅱ期临床试验为初期临床试验,是疗效的探索阶段;Ⅲ期临床试验为扩大临床试验,是疗效的验证性阶段,只有在初期临床试验IND获准后,申请人才可以提交扩大临床试验申请。在IND

  • 戒指杀手
    戒指杀手  发布了新帖 IND 、NDA、 ANDA区别 192天前

    信息均为转载,方便汇总学习,仍需要进一步补充完善~FDA新药审评程序包括新药临床试验申请IND申报和新药申请NDA申报两个过程,申请人在完成新药临床前研究后,便可向FDA提出IND申请,若FDA在收到后30天内未提出反对意见,申请人便可自行开展新药临床研究。仿制药申请通常被认为是简短的,因为这类申请不需要提供临床前动物和临床人体数据来证明其安全性和有效性。下面来看一下什么是IND申报、NDA申报和ANDA申报?1、IND申报IND主要目的是提供足够信息来证明药品在人体进行试验是安全的,以及证明针对研究目的的临床方案设计是合理的。IND主要包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床试验申请,其中Ⅰ、Ⅱ期临床试验为初期临床试验,是疗效的探索阶段;Ⅲ期临床试验为扩大临床试验,是疗效的验证性阶段,只有在初期临床试验IND

  • 戒指杀手
    戒指杀手  的帖子被加了1分 213天前

    回复:MC3T3细胞培养测定ALP,I型胶原蛋白,矿化问题

    均为转载,方便总结梳理借鉴~    查到06年的帖子MC3T3-E1是1981年***学者Kadama等由C57BL/6小鼠颅顶骨中分离培养所建的一株成骨细胞株(实际上是 a mouse osteoprogenitor cell line ),具备体...
  • 戒指杀手
    戒指杀手  回复了帖子 MC3T3细胞培养测定ALP,I型胶原蛋白,矿化问题 213天前
    均为转载,方便总结梳理借鉴~    查到06年的帖子MC3T3-E1是1981年***学者Kadama等由C57BL/6小鼠颅顶骨中分离培养所建的一株成骨细胞株(实际上是 a mouse osteoprogenitor cell line ),具备体外培养成骨细胞的各种生物学特性,包括碱性磷酸酶,I 型胶原的合成,基质矿化和响应甲状旁腺激素、维生素D3等,是一株良好的体外培养成骨细胞株。我们实验室常规用MC3T3-E1做药试等实验,一般用F-12培养基常规培养,14天左右就可以出现明显的钙化。其实在国内一般都用的是β-甘油磷酸钠,作为成骨诱导剂,不过这个细胞株是用不着的。顺便补充一下,F-12培养基配置:培养基干粉10g,加1.176g碳酸氢钠,L-谷氨酰胺0.
  • 戒指杀手
    戒指杀手  回复了帖子 MC3T3细胞培养测定ALP,I型胶原蛋白,矿化问题 213天前
    均为转载,方便总结梳理借鉴~成骨诱导液配置:诱导液:10-7M的地塞米松,10mM的β-甘油磷酸钠和50ug/mL的VC地塞米松和甘油磷酸钠可以配成母液先加到培养基里的,但VC要现配现用,注意避光,可以配成50mg/ml的母液分装保存起来,不过我建议你不要一次配几十天的用量,一次配个一周的,分装用那种100ul的EP管,因为容易氧化嘛,所以EP管理空气含量少一点对它的保存应该是有好处的,分装好之后放在-20度保存,每次用一支,用不完的就不要了,别想着下次再用,VC也不贵的,用的很少。 谷氨酰胺和丙酮酸钠 是能量物质,本身会降解,所以一般是每两周加一次的,至于这个有没有影响我没有做过对比试验,我是看ATCC上要加这些就一直加了的。2、我是细胞长满大概90%开始出现钙结节的,如果你细胞代数较早的
  • 戒指杀手
    戒指杀手  回复了帖子 MC3T3细胞培养测定ALP,I型胶原蛋白,矿化问题 213天前
    均为转载,汇总方便理解。成骨诱导液一般成分:成骨诱导液通常是由地塞米松,甘油磷酸钠和抗坏血酸组成的。具体作用:解释1:选择三者联合作为成骨诱导液,是细胞成功诱导的关键,而联合应用的原因在于:地塞米松:可以激活位于干细胞表面的糖皮质激素受体,显著地增加碱性磷酸酶的活性;抗坏血酸又称维生素c:是水溶性维生素的一种,从细胞水平看,它在体内可以参与多种反应,如参与氧化还原过程,在生物的氧化和还原过程以及细胞呼吸作用中扮演重要角色;从组织水平看,抗坏血酸的主要作用与细胞间质的合成有关,主要包括胶原、牙和骨组织的基质,以及毛细血管中内皮细胞间的接合物。抗坏血酸对成骨细胞分化的促进作用,主要是通过增加胶原的累积,然后增加碱性磷酸酶在成骨细胞中的表达甘油磷酸钠:可以为成骨细胞提供磷酸离子,同时促进生理性钙盐
  • 戒指杀手
    戒指杀手  发布了新帖 MC3T3细胞培养测定ALP,I型胶原蛋白,矿化问题 227天前

    均为转载,方便总结梳理借鉴~要做MC3T3-E1细胞诱导分化的实验1.诱导后3、7、10天检测ALP活性-----24孔板2.诱导后7、14天检测分化相关基因OCN表达-----6孔板3.诱导后14天茜素红染色-------6孔板问题(1)我的时间点设置是否合理?(2)24孔板和6孔板种板密度为多少合适?文献的数据相差很大,想问做过的战友有没有较为可靠的数据,因为诱导后细胞增殖减慢,实验周期长达14天,所以不知道种多少合适?(3)诱导的整个过程能不能传代?(4)茜素红染色的浓度用0.1%,调至PH4.2还是8.5?时间比较急,希望战友能指点一二,谢谢(1)时间不够长,基本要做到3周。(2)密度最好在70%以上,很多文献提到的都是完全汇合。(3)不传代。(4)茜素红不用调PH,但是我的经验是最

  • 戒指杀手
    戒指杀手  回复了帖子 六孔板 载玻片 231天前
    均为转载和整理,为了汇总一起,方便学习。1. 针对12孔板和6孔板,沿着孔一周边缘均匀接种,切记:不要接种孔中心区,若种出来中心区还稀的话,则下次可向中心区打两三滴细胞悬液。还有就是,千万不要像有些介绍说的前后啊或者左右啊或者上下啊晃晃板子什么的,一晃就全到中心区了。2.以前铺6孔板和24孔板,经常不匀,通常就是中间多,周围少的情况。经过长时间的摸索,终于基本解决了这个难题,基本操作:用前用1mlPBS或培养液将6孔或24孔板润湿,之后将稀释好的细胞混悬液接种于板上,6孔板每孔2ml即可,24孔最好1ml,0.5的效果不如1ml。因为是预先混好的,接种好后不用摇动,直接放入孵箱即可。关键是先润湿板,减少板与溶液间的界面张力,使细胞在没来得及沉下时,细胞悬液已经在板中铺匀,尤其是较易
  • 戒指杀手
    戒指杀手  发布了新帖 六孔板 载玻片 231天前

    此内容为复制转载,方便查找。晶安生物细胞爬片采用高端的玻片制作,厚度为0.17mm,有圆形和方形。已处理,已灭菌,拆开即用。最先进的玻片表面处理技术(TC处理→超强吸附)可促进细胞在玻片上贴壁生长,细胞贴壁牢固。即使在后期免疫组化、免疫荧光、原位杂交处理过程中也不易脱片,避免传统方法中从培养瓶转移到载玻片上的损伤。使用一步法细胞爬片不用预处理,避免在后期处理中细胞容易脱片等种种问题。爬片常用的规格:圆形(φ24mm、φ20mm、φ14mm、φ8mm)。双面经过TC处理,双面均可使用,避免了实验误差。爬片高强度耐酸碱,特殊实验浸泡一个星期均不会碎片。一步法细胞爬片只需打开包装即可使用,节省成本,节省实验员的试验时间。经过伽马射线灭菌,无DNA酶、无RNA酶、无热源。规格参数:货号 品名 尺寸

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    戒指杀手  :【专题讨论】细胞培养的成功因素——细胞消化篇 http://dxy.me/uUvyeu
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    戒指杀手  :【MTT 的操作方法(四)】六、MTT 结果分析关于如何计算 IC501、改良寇式法:lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)Xm:lg 最大剂量I:lg(最大剂量/相临剂量)P: 阳性反应 ... 来自@丁香通 http://dxy.me/7KwGNP
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    戒指杀手  :【MTT 的操作方法(三)】五、MTT 法实验步骤1. 胰酶消化对数期细胞,终止后离心收集,制成细胞悬液,细胞计数调整其浓度至 5~10×104/ml。细胞详细计数方法请参照易生物实验技术 ... 来自@丁香通 http://dxy.me/634gyC
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    戒指杀手  :【MTT 的操作方法(二)】四、实验所需材料1.MTT 溶液的配制通常 MTT 配成的终浓度为 5 mg/ml, 须用 PBS 或生理盐水做溶剂。市面上一般 MTT 的包装为 100 mg,250 mg 或 1 g1.1 对于 100 mg 这样的小包装, ... 来自@丁香通 http://dxy.me/bYJfya
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    戒指杀手  :【MTT 的操作方法(一)】一、MTT 是什么MTT 是一种粉末状化学试剂,全称为 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliu ... 来自@丁香通 http://dxy.me/sEHfcc
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    戒指杀手  :【细胞铺板:铺得均匀的小技巧】做细胞生物学实验,细胞铺板大概是最常见的一个实验。但是有很多人不是很得要领,铺得不是很均匀: 要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶。咋整?分享以下几点 ... 来自@丁香通 http://dxy.me/UniEVn
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    戒指杀手  :【献给初学者:如何看流式细胞术结果中的图?】FCM 数据的存贮的方式是 FCS2.0(flow cytometry standard),采用列表排队(List Mode)方式。易于加工处理分析,但缺乏直观性,数据 ... 来自@丁香通 http://dxy.me/kU8CBW
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    戒指杀手  :【什么是MTT,什么是MTT法】相关专题mtt 原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,汉 ... 来自@丁香通 http://dxy.me/qMvAZr;catId=730&articleId=46363&partId=
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    戒指杀手  :原代细胞培养的常见问题 (一) http://dxy.me/IR3ABj
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    戒指杀手  :【细胞培养大攻略】一、细胞培养基础和步骤细胞培养基大全:http://dxy.me/Ej67ba ... 来自@丁香通 http://dxy.me/qMvAZr;catId=493&articleId=67439&partId=
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