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TGICL软件的安装与使用

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est-trimmer的使用

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求助Phrap软件

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  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 GUS染色问题 1334天前

        最近在做瞬时表达,用农杆菌侵染愈伤组织,然后用GUS染色。我用2ml离心管,加500ul染色液,把一个愈伤组织放进去染色12-24h。但是发现两个问题,第一个是每个愈伤组织都是上面部分被染色,也就是朝着离心管口的一面,而朝着管底的一面完全没有染色。第二是对照,也就是没有用农杆菌侵染的愈伤组织也被染成蓝色,就像上面说的朝着管口的一面被染色,下半部分也是完全没有染色。不知道这种情况正常还是不正常,求大神解答。。。。。。

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 胁迫处理与GUS染色 1341天前

        请教各位大虾,我用农杆菌侵染愈伤组织,然后进行低温,高盐等胁迫处理,最后GUS染色。但是GUS染色好像一般是在37度过夜,这是否等于又是让愈伤组织经历了一次高温胁迫?感觉有点纠结了,求解答。。。。。。

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 GUS染色前要把农杆菌洗干净吗 1341天前

        请教各位大虾,俺用农杆菌侵染愈伤组织,用的是滴加侵染,也就是每个愈伤组织加5ul菌液,共培养两天后还要在胁迫下处理一天,然后GUS染色。请教,是在共培养之后,胁迫处理前洗除多余菌液,还是在胁迫处理后,GUS染色前洗除多余菌液好呢?具体洗的方法,我打算用无菌水洗几次就行了,是否非要用头孢呢,头孢好像很贵。。。

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 农杆菌短期保存怎么弄 1364天前

        请教各位大虾,农杆菌摇好了想短期保存(一个月内)应该怎么操作啊?网上找的都是加甘油-70度长期保存。。。能不能像大肠杆菌那样抽干培养基直接扔-20度呢

  • 我恨月亮
    我恨月亮  回复了帖子 GUS荧光定量用什么仪器啊 1364天前
    我们的全是紫外分光光度计,没有荧光分光光度计,估计是做不了了
  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 GUS荧光定量用什么仪器啊 1365天前

        就是用4-MU和4-MUG来测GUS的表达量,激发光365nm和发射光455nm测荧光强度,应该用哪种仪器啊,我们实验室只有几台分光光度计和一个酶标仪,不知道能不能做,请教各位大虾。。。。。。

  • 我恨月亮
    我恨月亮  回复了帖子 GUS染色液可以回收多次重复使用吗 1367天前
    昨天试了一下,感觉应该不能重复使用吧,因为染色前GUS染色液是浅黄色,染色后就变成蓝色了
  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 GUS染色液可以回收多次重复使用吗 1369天前

        请问各位师兄师姐,GUS染色液可以回收重复使用两三次吗?感觉用一次就扔有点浪费。。。。

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 农杆菌如何活化 1397天前

        从网上花450买了300ul农杆菌菌株,现-80度保存。请教各位师兄师姐,应该如何活化呢?是用接种环刮几下在平板上划线(剩的放回冰箱),还是让菌液全部解冻然后全部涂在+抗生素的平板上?俺想让它长出单菌落摇菌,然后自己做感受态。。。。。。。。

  • 我恨月亮
    我恨月亮  回复了帖子 非变性PAGE蛋白条带跑不动(非常普遍的问题) 1438天前
    不同的试剂盒方法有差异,先照着试剂盒做吧,我用的是invitrogen的EMSA试剂盒,要做非变性PAGE
  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 瞬时表达用植物的什么材料合适? 1439天前

        看了一些瞬时表达的文献,有用愈伤组织做的,有在叶片背面用去掉针头的注射器注射的(真心搞不懂这样还怎么注射),有用打孔器把叶片打成圆盘用农杆菌侵染的(这样叶片不是成了死组织了),还有注射子叶的。请问各位大虾,到底怎么做合适啊

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 非变性PAGE蛋白条带跑不动(非常普遍的问题) 1439天前

        俺最近在做EMSA,分别用8%,10%,12%分离胶(ph=8.8)和5%浓缩胶(ph=6.8)去跑未结合探针的蛋白和结合了探针的蛋白,但是所有蛋白条带跑到分离胶下面一丁点就跑不动了,探针倒是跑到了底部。用了0.75,1.0,1.5mm厚度的玻璃板都试过了,上样量也减半再减半了,结果全都一样。我做的蛋白PI=6点几,用的TBE缓冲液ph>8.5,所以应该也不是胶或者缓冲液ph的问题。电压200V,40分钟。我看别人的文献相似大小的蛋白能跑到分离胶中间部位。实在是想不到解决办法了,请各位师兄师姐不吝赐教,感激不尽。。。。。。。。

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 EMSA探针的问题 1463天前

        最近要做EMSA,买的invitrogen的试剂盒,让公司合成了一条27bp的探针,包括正反义链。拿回来自己做退火合成双链,总体积60ul,终浓度为50uM。步骤是放PCR仪里95度5分钟,然后关机让其自然冷却,大概4小时的样子。然后跑非变性PAGE电泳,发现得到的双链探针并不是像很多文献里的一条非常明显的单一条带,而是条带上下两端均有拖尾现象。    我觉得这种情况应该是正常的,因为就算加入等量的正反义链,整个退火过程应该也不会让它们完全反应,全都变成双链,应该还是有部分单连存在的。完全的单一条带,真的有人做出来吗?请问各位师兄师姐,我这种想法对吗

  • 我恨月亮
    我恨月亮  回复了帖子 纯化后的包涵体蛋白,先浓缩再复性还是先复性再浓缩? 1478天前
        先浓缩的话只剩几百微升,加入透析袋好像跟没加似的。。。。。
  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 纯化后的包涵体蛋白,先浓缩再复性还是先复性再浓缩? 1478天前

        请问各位师兄师姐,俺做了一个原核表达,发现蛋白在包涵体中表达,然后用his柱纯化,准备复性。但是柱纯化后蛋白浓度比较低,我是先用超滤管做浓缩还是先透析复性之后再浓缩好呢?

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 做EMSA需要蛋白复性吗 1481天前

          请教各位师兄师姐,俺打算先做原核表达,然后接着做EMSA。但是原核表达的蛋白主要在包涵体中,这样的蛋白可以直接用来做EMSA吗?还是必须先复性才能做? 复性的话用透析复性效果怎样,我看了下好像比较方便。。。

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 想做转基因烟草,种子在哪买啊 1504天前

        请教各位师兄师姐,做烟草转基因都用的什么品种,种子在哪买啊。。。。。。

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 原核表达对照问题 1517天前

        做原核表达到底应该设置多少对照啊,有的文献中只做了一个不加IPTG诱导的对照,有的还做了空载体对照,未加载体的DE3菌株的对照,到底做多少合适啊?而且后面的空载体和DE3菌株对照是不是都还要分别考虑诱导前和诱导后的两种情况,头都晕了,求大神解答。。。。。。。。

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 没有暗室怎么显色 1520天前

        实验室没有单独的暗室,能否在晚上做压片曝光什么的,灯一关不就成暗室了,不知道这样可否

  • 我恨月亮
    我恨月亮  发布了新帖 什么情况下需要做透析和超滤 1521天前

        请教各位大虾,原核表达的蛋白经Ni柱纯化后,在什么情况下需要透析和超滤,测浓度什么的,如果只做western blot的话 是不是不用做这些?

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