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  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 巨噬细胞凋亡或者过度自噬标志物? 728天前
    血清中很难检测自噬标志物.可以通过WB 检测自噬的标志蛋白,或者统计细胞中的自噬体!
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 冻存细胞提RNA 743天前
    先水浴融解后加PBS洗两次再加trizol,这个方法是可行的,不过细胞比较脆弱,水浴过程一定要快 
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 BD的FITC-PI试剂盒测凋亡,结果图分析疑问 748天前
    一般会选取12h,24h,48h,72h,96h五个时间点 
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 用293T产病毒时染菌了,可以上清过0.22滤膜再用吗? 748天前
    不可以哦,会有影响的,会把需要的病毒或菌给滤掉。
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 细胞周期能用刮铲来刮细胞吗 749天前
      最好不要直接刮,容易造成机械性损伤,如果细胞贴壁性比较强,可以先消化3分钟,再加完全培养基终止消化,再用细胞刮轻轻的刮下来,混到细胞悬液里,离心弃上清。
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 BD的FITC-PI试剂盒测凋亡,结果图分析疑问 750天前
    (1)图片没什么大用处,实验组和对照组没有明显差异。而且这个细胞贴壁性比较强,可能是消化细胞时间长了,或者吹打时比较用力造成了机械 损伤(2)FITC和PI的量足够,凋亡率比较低,应该还是给药浓度和作用时间的原因
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 关于细胞培养时要用阿司匹林 754天前
    影响阿司匹林水解的因素:溶液的温度,浓度以及酸碱性,水解可以得到乙酸和邻羟基苯甲酸,有些实验就是利用邻羟基苯甲酸的机理。
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 平滑肌细胞复苏后每天都有漂,传代后日渐稀少,求问解救办法 758天前
    1、分离的时候消化过度,可能。2、基本没救,因为原代分离时就已经损伤了,后续细胞应该观察一段时间,没恢复过来就不能消化传代,否则,损伤更严重。但是基本初代状态不佳就很难救回来了!
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  发布了新帖 斑马鱼总RNA的提取 890天前

    【实验目的】 1、掌握提取总RNA的原理和技术。 2、学习和掌握控制RNA酶活性的方法。 【实验原理】 分离纯净、完整的RNA对于分子克隆的实验是很重要的,而且是进行基因表达分析的基础。在总RNA中,75-85%为rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA),其余的由分子量大小和核甘酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、snRNA及snoRNA等组成。mRNA一般只占总RNA的1%左右,而且由于RNA酶(核糖核酸酶,RNase)广泛存在、活性稳定,其反应也不需要辅助因子,因而在RNA的制备过程中只要存在少量的RNA酶就难以获得完整的RNA;而所制备的RNA的纯度和完整性又直接影响着RNA分析的结果,长度大于4kb的转录本本身存在的几率更小,其对于痕量R

  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  发布了新帖 基因敲除 890天前

    构建以筛选基因新霉素(Neo)取代剔除基因的一个或多个外显子的质粒,转入ES细胞,获得正确发生同源重组的ES克隆。ES细胞进行囊胚注射,获得部分ES来源的嵌合鼠,嵌合鼠与野生型小鼠交配,最终获得来源于重组ES细胞的杂合子小鼠。杂合子小鼠一条染色体上的靶基因exon被Neo基因所取代,杂合子交配获得目的基因失活的纯合子小鼠。

  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  发布了新帖 DNA结合蛋白的分离及克隆 890天前

    1. 蛋白质纯化法和序列分析法 克隆DNA结合蛋白,首选蛋白质纯化法,在得到氨基酸序列后,设计PCR简并引物,用于扩增基因片段,最后通过cDNA文库筛选得到全长cDNA。该方法在共价交联有目的DNA序列的寡核苷酸多联体的柱层析树脂中进行。这种技术称为序列特异性DNA亲和层析。DNA亲和层析方法与常规的层析方法相似,但往往使用大量的蛋白质使层析柱超载,这样可以增加DNA亲和层析的成功率。 蛋白质纯化到某种程度后,在银染的凝胶上会看到一条带或多条带,因此需要进一步确定哪些条带的蛋白质与DNA结合活性相对应,可采用变性/复性、DNA―蛋白质印迹法及交联法进行确定。相对而言,变性/复性技术能够提供更多的信息。首先通过SDS―PAGE分离DNA亲和纯化样品中的蛋白质。电泳后,用刀片将凝胶上相关泳道切成

  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 细胞培养的成功因素——细胞消化篇 910天前
    含有酚红的消化液意思是含有酚红的胰蛋白酶消化液吗?
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 细胞培养的成功因素——细胞消化篇 910天前
     脐带血干细胞?脂肪干细胞 ??
  • 我就是大仙儿
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 细胞培养的成功因素——细胞消化篇 999天前
    可能是由于环境改变影响了细胞的生长,如果是原代细胞这种现象很常见;可以直接将细胞刮下来就可以了
  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  发布了新帖 原代细胞培养和传代培养的方法 1007天前

    原代培养原理 :将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。初代消化培养法1. 准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2. 布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。3. 处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。4. 剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。5. 消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱

  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  发布了新帖 基因芯片技术 1096天前

    基因芯片检测原理 : 杂交信号的检测是DNA芯片技术中的重要组成部分。以往的研究中已形成许多种探测分子杂交的方法,如荧光显微镜、隐逝波传感器、光散射表面共振、电化传感器、化学发光、荧光各向异性等等,但并非每种方法都适用于DNA芯片。由于DNA芯片本身的结构及性质,需要确定杂交信号在芯片上的位置,尤其是大规模DNA芯片由于其面积小,密度大,点样量很少,所以杂交信号较弱,需要使用光电倍增管或冷却的电荷偶连照相机(charged-coupled device camera,CCD)摄像机等弱光信号探测装置。此外,大多数DNA芯片杂交信号谱型除了分布位点以外还需要确定每一点上的信号强度,以确定是完全杂交还是不完全杂交,因而探测方法的灵敏度及线性响应也是非常重要的。杂交信号探测系统

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  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  发布了新帖 裸鼠成瘤模型分享 1117天前

  • 我就是大仙儿
    我就是大仙儿  回复了帖子 心律失常动物模型的复制 1117天前
    有相关的参考文献吗,不知道您说的跟我这边的是否是一致的,最好提供参考文献看下

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