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【求助】HUVEC细胞最多能传多少代

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【求助】P不出条带的原因

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【求助】有谁养CHO——K1sv细胞的?

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  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 表达量急剧下降的原因考究 90天前
            @twyhappy 话是这么说,但是细胞的表现差异太大的话,就比较担心细胞的稳定性问题,因为找不到合理的解释,担心对下游的挑战比较大的。
  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 表达量急剧下降的原因考究 97天前
            @醉默沙洲: 气泡其实并不多,一共就加了两次。产量是用Fotibio 检测的,单位是mg/L,检测是没有问题的,在ambr上的数据看着是有点奇怪的。
  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 表达量急剧下降的原因考究 97天前
            @醉默沙洲: 培养基跟补料都正常,细胞从T25 到TPP 就传了一代,就直接接种Fed-batch了,没有时间去观察生长倍增,接种密度两者是按照相同的密度接种的,不过TPP是用原管,所以也考虑是比实际的要接种的多一点,目前再验证这个问题。同时在stability的实验中0.4 的密度接种算D0,那么D3计数基本在2.0-2.9的密度,所以增殖还算正常。不过Feed batch中如附件,黄色标注的TPP的D3-D5 的增殖显然要快很多@laorentou:我们也在考虑搅拌的剪切跟气体对细胞的影响,我上传附件中黄色标注的是在TPP的数据,对比可以看出在TPP中D3-D5,细胞的增殖飞速的,而在ambr中的速度显然落后了。所以Ambr中我Feed是在D4开始Feed的。就是担心过早
  • 张小雅yy
    张小雅yy  发布了新帖 表达量急剧下降的原因考究 102天前

    最近做一个项目,host cell是horizon的GS缺陷的CHO,双抗,minipool表达有3g左右,单克隆后4g.问题: SCC 是在TPP里做的,20ml,Dynamis培养基,0.5接种,D3 feed Hyclone7a/7b, 隔天补料,3%/0.3%,SCC1 density peak 17左右SCC2 density peak 25左右SCC3 density peak 38左右D5开始,每两天耗糖8-9g,D9开始活率下降,D13产量4-5g然而问题是,我筛出这三株,重新复苏摇瓶里长的没有在TPP里快,接种Ambr15以及发酵罐,同样0.5接种,除了SCC1的density peak只减少几个million,剩下两株都减少一半的密度,不耗糖,产量也减少了2/3。不知道是

  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 细胞库检定 418天前
    想问一下,逆转录病毒检测的标准是什么?哪里可以查到?
  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 种子库与细胞库建立GMP要求及厂房布局讨论 418天前
    想请问一下,逆转录病毒的检测标准是什么?在什么范围内是可接受的检测范围?
  • 张小雅yy
    张小雅yy  发布了新帖 细胞冻存密度考究 657天前

    CHO细胞,种子养到6X10E6,活率99% ,冻存作为RCB。不知道此细胞密度冻存的bank,是否稳定?有没有相关文献或法规要求?

  • 张小雅yy
    张小雅yy  发布了新帖 关于细胞株筛选中培养基优化以及筛选工艺的DOE设计讨论 671天前

    最近在学习DOE设计,但是应用到细胞株筛选和培养基优化的实验还是有些困难,理论很难与实践相结合,求大神分享一下细胞筛选和工艺这块的DOE设计

  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 发酵罐 726天前
    电极应该没有问题,离线测鉴定过。这次发酵的两个问题是:50ccm空气恒通一晚上同时overlay100%,P第二天PH并没有出现波动,但是在7.1左右。问题二是矫正DO 的slope 100% 后,设置溶氧40% 级联空气2%-7.5%,overlay100%,然后PH设定6.9加减0.3。3-4h后溶氧在80-90%(以前这个时间后溶氧会掉到60%-70%)上细胞。D1观察细胞,出现死亡现象,溶氧基本在90%。掉不下去。D2细胞基本都死了。经过反思应该是溶氧太大造成的,所以在溶氧高于设定值时是不是DO跟Air的级联:Air应该设置在0%-7.5%,overlay也应该在发酵的D4以后再开开
  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 发酵罐 726天前
    电极应该没有问题,离线测鉴定过。这次发酵的两个问题是:50ccm空气恒通一晚上同时overlay100%,P第二天PH并没有出现波动,但是在7.1左右。问题二是矫正DO 的slope 100% 后,设置溶氧40% 级联空气2%-7.5%,overlay100%,然后PH设定6.9加减0.3。3-4h后溶氧在80-90%(以前这个时间后溶氧会掉到60%-70%)上细胞。D1观察细胞,出现死亡现象,溶氧基本在90%。掉不下去。D2细胞基本都死了。经过反思应该是溶氧太大造成的,所以在溶氧高于设定值时是不是DO跟Air的级联:Air应该设置在0%-7.5%,overlay也应该在发酵的D4以后再开开
  • 张小雅yy
    张小雅yy  发布了新帖 发酵罐 726天前

    发酵罐,上完培养基,50ccm空气恒通一晚上,为啥PH没有变化?之前都会变碱的?软件还不是很熟悉,请问哪里可能出了问题了

  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 真菌污染 809天前
    我觉得不像是霉菌,
  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 copy number 812天前
    自己做的
  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 细胞株筛选时 pool的选择,大 pool Vs mini pool 812天前
    @pk1206 你绿色的细胞株,后期恢复的怎么样?有没有做培养基的优化,就目前的图来看,绿色的细胞density Peak 不高,对于后期工艺放大会有影响,你们最终是怎么选择的?对绿色的优化?还是选择比较中庸的蓝色?
  • 张小雅yy
    张小雅yy  的帖子被加了1分 818天前

    回复:细胞株筛选时 pool的选择,大 pool Vs mini pool

    minipool 的定义应该是做完转然后铺96孔板,至于你是做1000个/well 还是10000个/well 要看你的细胞存活率了,通常Bio-Red的电转仪在电转完加压筛选,还是建议在10000个/well.不过Maxcyte的电转仪,他家电完细胞后加压筛选,可以1000个/...
  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 细胞株筛选时 pool的选择,大 pool Vs mini pool 826天前
    minipool 的定义应该是做完转然后铺96孔板,至于你是做1000个/well 还是10000个/well 要看你的细胞存活率了,通常Bio-Red的电转仪在电转完加压筛选,还是建议在10000个/well.不过Maxcyte的电转仪,他家电完细胞后加压筛选,可以1000个/well 铺板子,细胞存活率很高。
  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 细胞株筛选时 pool的选择,大 pool Vs mini pool 830天前
    时间上不会差的太多,最多也就两个星期,还是建议直接做minipool,能有效的筛选到高表达。至于Bulk pool,鱼龙混杂的,高表达株容易丢失。
  • 张小雅yy
    张小雅yy  的帖子被加了1分 839天前

    回复:能跟我说说GS系统的吗?CHO细胞做GS系统,到底用什么细胞做的,CHOK1还是CHO_S.有人尝试做过吗

    关于MSX加压的机制还有另外的见解,如文献所示
  • 张小雅yy
    张小雅yy  回复了帖子 能跟我说说GS系统的吗?CHO细胞做GS系统,到底用什么细胞做的,CHOK1还是CHO_S.有人尝试做过吗 839天前
    关于MSX加压的机制还有另外的见解,如文献所示
  • 张小雅yy
    张小雅yy  的帖子被加了1分 840天前

    回复:能跟我说说GS系统的吗?CHO细胞做GS系统,到底用什么细胞做的,CHOK1还是CHO_S.有人尝试做过吗

    最近一直在纠结MSX和MTX压力筛选的本源问题。听过一个报告,说MTX随着梯度浓度增加,也能够使外源能到扩增。而MSX梯度加压是不能达到这种扩增效果的,意思也就说用一个浓度加压后筛选出来的细胞,在此基础上增加药物浓度,并不能提高蛋白的产量,而MTX是可以的,对于这个解说不知道各位...

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