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  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 siRNA电转 18天前

    将siRNA电转后细胞后,24小时后由于细胞密度太大,离心转移到6孔板中,发现细胞状态不是很好?请问siRNA一般是48h小时后体蛋白做WB,那两天中不需要转移到大的孔板中吗?其次,24小时后还需要注意RNA酶污染吗?(个人认为不需要,因为siRNA已经进入细胞中了),希望各位回答,谢谢!**

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 siRNA电转浓度问题 36天前

    按照lonza说明书,将siRNA加入到100ul的转染试剂中,重悬细胞加入转染杯,转染后,吸出细胞加入到24孔板中(已加入0.9ml培养基)。请问文献中说的100nM的siRNA指的是加入到24孔板中(100ul+900ul)的终浓度还是100ul转染试剂的浓度?**

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  回复了帖子 ChIP实验后的Qpcr问题 47天前
    楼主,你解决这个问题了吗?求解答
  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 CHIP验证阶段阳性对照PCR无条带 50天前

    各位大神,用的millpore的磁珠试剂盒,按照说明书的步骤一步一步做下来,到最后PCR验证阶段,阳性对照anti-RNA pol II PCR跑胶后没条带,用的自带试剂盒对照引物,用2×Taq酶和高保真酶都没有条带,到底是什么问题?拜托了

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  回复了帖子 lonza电转 60天前
    请问,你用电转做过双荧光素报告基因的实验吗?有些问题想咨询您
  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 lonza电转 64天前

    请问大家,用lonza电转三个质粒(做Luciferase),效率非常低,荧光素值只有10左右。用自带的GFP质粒效率达70%电转三个质粒只需要进行一次电转程序吗?为什么效率如此低?试剂盒太贵,麻烦大神

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 CHIP超声电泳图 86天前

    请问各位:程序是40%功率,7s on,9s off,从左到右17min、22min,27min,30min,35min,40min;用的2000marker。问题:1.为什么时间越长反而打断的片段越短?2、超声这么长时间蛋白会不会降解?3、打断的片段大概在1500bp左右,我看丁香园说2000bp就可以了,请问我可以用于后续的研究吗?谢谢

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  回复了帖子 chip超声破碎的泡沫问题 93天前
    楼主,你好。最近我也要用这款超声仪做CHIP,超声B细胞,有没有具体的程序可以下载的?谢谢
  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 慢病毒包装 222天前

    利用293T包装慢病毒,请问包装293T这一皿基因组有整合上目的基因吗?还是仅仅只是包装病毒,分泌病毒颗粒?谢谢

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  回复了帖子 病毒包装答疑,你有哪些不解之处?【2017/11/21更新】 248天前
    请问,在293T包装病毒,用病毒上清感染目的细胞,形成的稳定细胞系还有病毒吗?还分泌病毒颗粒吗?谢谢
  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  回复了帖子 双荧光素酶结果分析 248天前
    增加PGL2-目的基因promoter质粒的量,保证萤火虫数据比海参高
  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 病毒感染 248天前

    在293T细胞中包装好病毒,用病毒上清感染目的细胞,形成稳定细胞系后,请问稳定细胞系还有病毒存在吗?还会分泌病毒颗粒吗?谢谢

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 overlap 261天前

    请教:利用overlap突变一个氨基酸。例如:将K突变为A,而丙氨酸对应的碱基有好几个GCU/GCC/GCA/GCG,那选择哪一个呢?突变后利用病毒感染293T。

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 细胞增殖比较 263天前

    用慢病毒构建了几个稳定的突变细胞株,想比较不同突变后细胞株的增殖情况,想问大家,该采用哪种方法?①MTT,那我需要做这几个突变细胞株的生长曲线,然后再加MTT吗?但是貌似不要控制每组都在对数期。②流式测群里有前辈做过类似的实验没,请赐教。

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  回复了帖子 慢病毒包装 269天前
    请您解答一下,谢谢!用PEI和lipo2000转染时,各组都要求加的目的质粒量一致。用病毒包装转运目的质粒后,取病毒上清加入细胞中,怎么保证各组的质粒量一致呢?测量病毒滴度后加入细胞,但有些感染性的病毒颗粒又不含有目的质粒?
  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 慢病毒包装 270天前

    最近需要进行慢病毒包装,有些问题实在有点纠结,希望大神可以解答?将转运目的质粒,包装质粒,包膜质粒共转染293T细胞,收集病毒上清后。是否有感染性的病毒颗粒都含有转运目的质粒,转运目的质粒在一个病毒颗粒中的拷贝是一??谢谢!

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 怎么用SPSS软件处理双报告基因数据 295天前

    总共有4种片段连接到PGL2载体上,每组设置3个重复;每组有对应的对照,也设置3个重复。文献说计算数据“平均值+-标准差”表示,用SPSS进行数据分析。想咨询大神,该如何分析?是有方差分析还是??

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  发布了新帖 测序结果 535天前

    最近在构建载体?将两个目的基因(A和B基因)连上PMX质粒上,想表达融合蛋白。第一次测序,公司只测了一个反应,回来结果和A基因一致,按理说,应该可以确保连上了,但是为了放心一点,又叫公司加测了一个反应,但是结果和B基因的相差很远??想请教,我还能放心用吗?

  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  回复了帖子 同源重组法进行质粒载体构建? 544天前
    我也正在做质粒载体构建。目的基因先PCR,纯化,酶切,纯化载体酶切,跑胶,纯化连接但是我现在卡在载体酶切上,一直切不开
  • 小赵艺龙
    小赵艺龙  回复了帖子 GFP载体质粒转染后WB问题 548天前
    楼主解决问题了吗?本人也困惑中

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