可以看一下这个BIODAI的操作。

管子是可以多次使用的，但是要做好处理，病毒浓缩不知道楼主用的什么提取的，其实有直接浓缩的盒子的，比较方便，知道的有BIODAI,ABI的。

慢病毒浓缩，可以看一下这个BIODAI 的操作：

可以有相关盒子进行提取的吧，可以去看看，一些BIODAI,ROCHE,QIAGEN可以咨询一下。

或许可以试一下这个BIOG DNA Dried Blood Spots Kit ，最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染，可以直接应用于 PCR、荧光定量 PCR 和各种酶切试验等。

你这个提取的纯度不是很高啊，或许可以试试BIODAI 的，因为用这个提取过血清dna，检测出来，A260:280有1.83的。

有用过BIOGHC Elitefast SYBR One Step Kit ，使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，有效避免了非特异扩增；反应缓冲液经充分优化，灵敏度高，最低可检测1pg总RNA中的目标片段,特别适合低拷贝RNA的检测。

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额，一般假病毒实验都会外包的，这样更方便些，有了解过BIODAI的自主研发的假病毒纯化系统，纯度高，无外源未包裹DNA或RNA物质污染；病毒样颗粒无传染性，不会对实验人员造成伤害，因此生物安全性好；滴度高，每毫升可达106拷贝；整体还算是可以的。

假病毒包装流程：目的基因的合成→假病毒载体的构建→假病毒包装纯化→假病毒滴度测定，一般就是这样的，BIODAI装甲病毒（假病毒）应包裹有完整的待测核酸片段，特别是待测RNA片段。纯度足够高，无未包裹的外源污染性DNA或RNA。稳定性好，-20℃应保存6个月以上。

没错，这个主要就是看四个象限的额，要看清横纵坐标的，有时会不一样。按你这个图的话，B1是坏死细胞，B2是晚期凋亡细胞，B3是活细胞，B4是早期凋亡细胞。一般细胞凋亡检测方法是Annexin V/PI 双染色法和TUNEL法。可以看一下BIODAI，检测上还是可以的。

选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验的影响非常大，可以直接影响实验结论和结果，所以一定选择低毒性的转染试剂，看一个转染试剂毒性是否低，有一个简单的方法，看转染的过程和要求，比如要 求的细胞密度越大，说明毒性越大，比如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短，说明毒性越大。之前我师姐给我推荐了RFect小核酸转染试剂，确实低毒性，而且操作简便。实际上，由于培养条件的频繁变化，可能会对细胞表达模式产生影响，对后续的mRNA和蛋 白分析也同样产生影响，最终影响实验的可靠性。希望对你有帮助。

楼上提到的RFECT有使用过24孔板转染过293T细胞，应避免包装反应体系中存在血清，因血清会干扰 DeofectEU 与DNA形成复合物 。如果转染DNA量较大或者当复合物包装时反应体系中出现沉淀时,请将包装反应体系调整至1 ml进行。

你这个转染3T3细胞的效率有点太低了，之前我们实验室转染过3T3细胞，刚开始用的Lipo发现细胞毒性略大，转染后有很多细胞飘起来，听了其他实验室同学的介绍换了biodai的，用下来飘起来的细胞没有以前多了，细胞的铺板密度一般在45%左右 。

siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA，siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件，可以考虑换转染试剂，RFect小核酸转染试剂可以试试，据说专门针对难转染细胞的，普通细胞效果更好。

你这种情况，我们实验中还没遇到过，会不会是传代时的密度过大或培养时间过久导致的，或许换个转染试剂看看，RFECTR在转染是的效果在各种细胞上都是可以的，转染效率还是可以的。

楼主可以试试 DeofectEU Transfection Reagent转染的步骤，转染效果还是不错的：1.转染前24小时左右对细胞进行转接，接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞； 2.过夜培养。B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染): 1.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(2~5µl/µg DNA，参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 2.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的DNA (0.8~1µgDNA/孔， 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中，用移液

这是用 DeofectEU Transfection Reagent转染的步骤：1.转染前24小时左右对细胞进行转接，接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞； 2.过夜培养。B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染): 1.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(2~5µl/µg DNA，参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 2.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的DNA (0.8~1µgDNA/孔， 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室