选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验的影响非常大，可以直接影响实验结论和结果，所以一定选择低毒性的转染试剂，看一个转染试剂毒性是否低，有一个简单的方法，看转染的过程和要求，比如要 求的细胞密度越大，说明毒性越大，比如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短，说明毒性越大。之前我师姐给我推荐了RFect小核酸转染试剂，确实低毒性，而且操作简便。实际上，由于培养条件的频繁变化，可能会对细胞表达模式产生影响，对后续的mRNA和蛋 白分析也同样产生影响，最终影响实验的可靠性。希望对你有帮助。

楼上提到的RFECT有使用过24孔板转染过293T细胞，应避免包装反应体系中存在血清，因血清会干扰 DeofectEU 与DNA形成复合物 。如果转染DNA量较大或者当复合物包装时反应体系中出现沉淀时,请将包装反应体系调整至1 ml进行。

你这个转染3T3细胞的效率有点太低了，之前我们实验室转染过3T3细胞，刚开始用的Lipo发现细胞毒性略大，转染后有很多细胞飘起来，听了其他实验室同学的介绍换了biodai的，用下来飘起来的细胞没有以前多了，细胞的铺板密度一般在45%左右 。

siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA，siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件，可以考虑换转染试剂，RFect小核酸转染试剂可以试试，据说专门针对难转染细胞的，普通细胞效果更好。

你这种情况，我们实验中还没遇到过，会不会是传代时的密度过大或培养时间过久导致的，或许换个转染试剂看看，RFECTR在转染是的效果在各种细胞上都是可以的，转染效率还是可以的。

楼主可以试试 DeofectEU Transfection Reagent转染的步骤，转染效果还是不错的：1.转染前24小时左右对细胞进行转接，接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞； 2.过夜培养。B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染): 1.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(2~5µl/µg DNA，参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 2.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的DNA (0.8~1µgDNA/孔， 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中，用移液

这是用 DeofectEU Transfection Reagent转染的步骤：1.转染前24小时左右对细胞进行转接，接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞； 2.过夜培养。B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染): 1.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(2~5µl/µg DNA，参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 2.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的DNA (0.8~1µgDNA/孔， 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室

选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验的影响非常大，可以直接影响实验结论和结果，所以一定选择低毒性的转染试剂，看一个转染试剂毒性是否低，有一个简单的方法，看转染的过程和要求，比如要 求的细胞密度越大，说明毒性越大，比如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短，说明毒性越大。之前我师姐给我推荐了RFect小核酸转染试剂，确实低毒性，而且操作简便。实际上，由于培养条件的频繁变化，可能会对细胞表达模式产生影响，对后续的mRNA和蛋 白分析也同样产生影响，最终影响实验的可靠性。希望对你有帮助。 

转染时一定要注意脂质体的毒性,随时观察细胞状态,一旦细胞状态变化要及时终止转染,但转染效率与转染时间有一定的关系,太短的转染时间会导致转不进去而转染失败,使用BIODAI 如果你的细胞比较耐受,你可以在严密监视细胞的情况下尽量延长转染时间。

调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。RFECT成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数 量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高。由于siRNA沉默时效性的影响，转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测，转染后48-72小时才能 进行蛋白检测。如果转染时铺板密度较高，细胞一方面转染效果不理想，直接影响沉默效果和数据可靠性，另一方面，48小时甚至更长时间后，沉默检测最佳点 时，过于密集的细胞将影响细胞状态，从而影响实验结果。

楼主不加药之后你怎么转染的，效果上怎么样，楼主有用什么转染试剂转染MCF-7吗？LIPO和RFECT有用过，效果怎样。

转染时一定要注意脂质体的毒性,随时观察细胞状态,一旦细胞状态变化要及时终止转染,但转染效率与转染时间有一定的关系,太短的转染时间会导致转不进去而转染失败,如果你的细胞比较耐受,你可以在严密监视细胞的情况下尽量延长转染时间,b:最好能设一个脂质体的梯度,找到最佳脂质体用量b:延迟RFECTG418的加入时间,c:每一个G418浓度间隔时间延长。

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siRNA转染先把细胞株激活再转染,这样应该不能提高转染效率。我们实验室用24孔板做，每孔2ulRFECT，设置siRNA终浓度10nM,30nM,50nM,100nM四个梯度，每个梯度做2个复孔,做转染前一天铺板,细胞密度在45%。

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来了

额，，我们实验室用的RFECT转染3T3细胞的，整提效果上还是可以的，转染前用opti—MEM洗 细胞两次，然后进行转染，转染5、6个小时后要观察细胞状态，细胞毒性较低，整提实验下来还是可以的。