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  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 求助:Huvec细胞用RNAIMAX转染后细胞立即死掉是什么原因? 1天前
    选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验的影响非常大,可以直接影响实验结论和结果,所以一定选择低毒性的转染试剂,看一个转染试剂毒性是否低,有一个简单的方法,看转染的过程和要求,比如要 求的细胞密度越大,说明毒性越大,比如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短,说明毒性越大。之前我师姐给我推荐了RFect小核酸转染试剂,确实低毒性,而且操作简便。实际上,由于培养条件的频繁变化,可能会对细胞表达模式产生影响,对后续的mRNA和蛋 白分析也同样产生影响,最终影响实验的可靠性。希望对你有帮助。
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 实验小白siRNA转染操作前细胞计数以及Lipo3000问题 8天前
    楼上提到的RFECT有使用过24孔板转染过293T细胞,应避免包装反应体系中存在血清,因血清会干扰 DeofectEU 与DNA形成复合物 。如果转染DNA量较大或者当复合物包装时反应体系中出现沉淀时,请将包装反应体系调整至1 ml进行。
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  的帖子被加了1分 9天前

    回复:lipo3000转染细胞

    实验菜鸟lipo3000 lipo3000过表达,做了几次,3T3细胞,效率还不到10%,用的无血清DMEM稀释,混合后加入到DEME有血清的培养基中,不知道哪里不对,效率那么低,混匀的过程有说不能吹的,我不知道有没你这个转染3T3细胞的效率有点太低了,之前我们实验室转染过3T3...
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 lipo3000转染细胞 9天前
    你这个转染3T3细胞的效率有点太低了,之前我们实验室转染过3T3细胞,刚开始用的Lipo发现细胞毒性略大,转染后有很多细胞飘起来,听了其他实验室同学的介绍换了biodai的,用下来飘起来的细胞没有以前多了,细胞的铺板密度一般在45%左右 。
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 转染后细胞筛选的问题 14天前
    siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA,siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件,可以考虑换转染试剂,RFect小核酸转染试剂可以试试,据说专门针对难转染细胞的,普通细胞效果更好。
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 APPsw稳定转染的SH-SY5Y细胞,培养基浑浊 14天前
    你这种情况,我们实验中还没遇到过,会不会是传代时的密度过大或培养时间过久导致的,或许换个转染试剂看看,RFECTR在转染是的效果在各种细胞上都是可以的,转染效率还是可以的。
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 SW480 SW620 转染效率较高的转染方法 14天前
    楼主可以试试 DeofectEU Transfection Reagent转染的步骤,转染效果还是不错的:1.转染前24小时左右对细胞进行转接,接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞; 2.过夜培养。B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染): 1.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的转染试剂(2~5µl/µg DNA,参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 2.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的DNA (0.8~1µgDNA/孔, 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中,用移液
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 求助:把化学合成的siRNA用Lipo2000转染进293T细胞! 14天前
    这是用 DeofectEU Transfection Reagent转染的步骤:1.转染前24小时左右对细胞进行转接,接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞; 2.过夜培养。B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染): 1.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的转染试剂(2~5µl/µg DNA,参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 2.在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的DNA (0.8~1µgDNA/孔, 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀后在室
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 不同种属siRNA转染 14天前
    选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验的影响非常大,可以直接影响实验结论和结果,所以一定选择低毒性的转染试剂,看一个转染试剂毒性是否低,有一个简单的方法,看转染的过程和要求,比如要 求的细胞密度越大,说明毒性越大,比如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短,说明毒性越大。之前我师姐给我推荐了RFect小核酸转染试剂,确实低毒性,而且操作简便。实际上,由于培养条件的频繁变化,可能会对细胞表达模式产生影响,对后续的mRNA和蛋 白分析也同样产生影响,最终影响实验的可靠性。希望对你有帮助。 
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 求助!!!!PEI转染293细胞!!!! 15天前
    转染时一定要注意脂质体的毒性,随时观察细胞状态,一旦细胞状态变化要及时终止转染,但转染效率与转染时间有一定的关系,太短的转染时间会导致转不进去而转染失败,使用BIODAI 如果你的细胞比较耐受,你可以在严密监视细胞的情况下尽量延长转染时间。
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 如何提高瞬时转染的效率? 16天前
    调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。RFECT成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数 量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高。由于siRNA沉默时效性的影响,转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测,转染后48-72小时才能 进行蛋白检测。如果转染时铺板密度较高,细胞一方面转染效果不理想,直接影响沉默效果和数据可靠性,另一方面,48小时甚至更长时间后,沉默检测最佳点 时,过于密集的细胞将影响细胞状态,从而影响实验结果。
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 耐他莫昔芬MCF-7细胞老是养不活 16天前
    楼主不加药之后你怎么转染的,效果上怎么样,楼主有用什么转染试剂转染MCF-7吗?LIPO和RFECT有用过,效果怎样。
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 悬赏5个丁当,乳腺正常上皮细胞MCF-10A和乳腺癌低侵MCF-7细胞质粒转染问题 16天前
    转染时一定要注意脂质体的毒性,随时观察细胞状态,一旦细胞状态变化要及时终止转染,但转染效率与转染时间有一定的关系,太短的转染时间会导致转不进去而转染失败,如果你的细胞比较耐受,你可以在严密监视细胞的情况下尽量延长转染时间,b:最好能设一个脂质体的梯度,找到最佳脂质体用量b:延迟RFECTG418的加入时间,c:每一个G418浓度间隔时间延长。
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    小狐狸的尾巴  回复了帖子 细胞信号版月度风云榜奖励-2019年3月 16天前
    id:dxy_ciw4uvl奖励:12个丁当   
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 细胞信号版月度风云榜奖励-2019年3月 17天前
    id:dxy_ciw4uvl奖励:12个丁当
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 siRNA细胞转染注意事项 17天前
    siRNA转染先把细胞株激活再转染,这样应该不能提高转染效率。我们实验室用24孔板做,每孔2ulRFECT,设置siRNA终浓度10nM,30nM,50nM,100nM四个梯度,每个梯度做2个复孔,做转染前一天铺板,细胞密度在45%。
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 细胞信号版月度风云榜奖励-2019年3月 17天前
    id:dxy_ciw4uvl奖励:12个丁当
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  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  回复了帖子 [求助]NIH3T3的转染 20天前
    额,,我们实验室用的RFECT转染3T3细胞的,整提效果上还是可以的,转染前用opti—MEM洗 细胞两次,然后进行转染,转染5、6个小时后要观察细胞状态,细胞毒性较低,整提实验下来还是可以的。
  • 小狐狸的尾巴
    小狐狸的尾巴  的帖子被加了1分 22天前

    回复:【实验求助】siRNA 转染 H9C2细胞

    转染H9C2细胞株转染效率是偏低的,lipo的毒性是偏高的,可能导致细胞死亡的较多,或许楼主可以试试换种转染试剂看效果,听说RFECT的细胞毒性较低,可以弥补一下LIPO的不足,而且最好还是用48h后qPCR检测或者72h后蛋白水平检测。

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