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  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 iND申报 7天前
    GMP条件,要包括可控的设备和环境
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 有人试过ProteinA 用碱性洗脱也洗脱吗 11天前
    你这等电点是理论计算的吧,不是实际检测的吧?
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 有人试过ProteinA 用碱性洗脱也洗脱吗 14天前
    调节ph到多少会产生沉淀,
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 【讨论】求电荷异构体对抗体质量的影响的讨论 14天前
    如果是biosimilar,就要好好考虑了
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 临床研究阶段与报产阶段生产工艺变更 14天前
    我只知道这个工艺验证是cGMP条件下连续三批拟上市规模的生产
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 亲和层析收率极低的原因 16天前
    1.测定流穿液,仍可检测到蛋白,把流穿液重新用mabselect sure 捕获,洗脱时有峰,但此峰的UV260大于uv280,中和后蛋白仔进行检测,浓度接近于0
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 生物制品共线生产清洁验证如何开展 20天前
    有什么规定或者指导原则明确说明残留的检项或者标准吗?
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 关于药液澄清度问题 21天前
    请问使用前的泡点实验?用水来来做吗?那么后续怎么进行排干
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 细胞株传代稳定性产量影响因素 21天前
    表中没有“趋势”,只是P12到P17骤然下降,然后P17到P22 又稳定了。
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 有人试过ProteinA 用碱性洗脱也洗脱吗 21天前
    这这,碱性洗脱,岂不违背了protein A洗脱的原理。研究表明,protein A和蛋白在ph3.0条件下,分子间的作用力(静电作用)减弱,从而洗脱。请问您的蛋白是?pI是6还是在6的附近呢?
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 抗体药物的多聚体高 21天前
    一般是不是用G3000
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 34天前
    wash1和wash2的时候uv280没有起来,也就是无峰,已经采用ph3.2进行洗脱,并且再生和随后的消毒并没有峰出现,所以应该不是洗脱ph的问题。
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 34天前
    1.  用的是50mM的盐,为何洗脱电导才0.4ms/cm?醋酸钠体系,电导在0.4-0.5 mS/cm1、两者的配基肯定有不同的,虽然都是Protein A,但是重组的,不同厂家不同类型,结构域选取的不一样。具体哪块Poros A/20 没找到资料。 遇到过有个项目测Titer 用其他品牌的不结合,最终只有Poros A/20结合、 建议试试Thermo的MabA 填料 同品牌根据以前的项目经验,Mab Capture A的载量并不高,还是有必要试一下2、洗脱pH3.5,拉的梯度,4.5就能洗脱,这个结合得也太不牢了吧,正常3.8左右比较常见- - 通过逐步稀释的方式调节pH或者换液的方式看看是否可行,pH4.5,不是特别低洗脱pH是3.5,一步洗脱,未拉梯度。请问逐步稀释或者换
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 35天前
    表格单位确认下没有标错? 请问您对哪个单位有疑问?1、Poros A/20 与Mabselect 系列配基还是有差异的,存在PoroA 能挂柱 Mab系列挂不住,Sure Sure Lx PrismA配基也有差别,结合域也有差异。 没有考虑配基的问题,考虑了基架不一致,尝试了聚甲基丙烯酸甲酯基架系列的填料,没有改善。请问pros A 20和mab系列的配基不同点在哪里?Protein G HP 是没有穿透? 那么还是关注下结合域。  类型是G4? Protein G HP没有测流穿液的titer,不是没有穿透,蛋白是IGg1.2、收率低还是在于沉淀。 Elution 电导太低- -基本无缓冲能力,抗体不稳定。建议洗脱剂增加至20mM,同时增加
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 急求:亲和层析收率低的原因 35天前
    表格单位确认下没有标错? 请问您对哪个单位有疑问?1、Poros A/20 与Mabselect 系列配基还是有差异的,存在PoroA 能挂柱 Mab系列挂不住,Sure Sure Lx PrismA配基也有差别,结合域也有差异。 没有考虑配基的问题,考虑了基架不一致,尝试了聚甲基丙烯酸甲酯基架系列的填料,没有改善。请问pros A 20和mab系列的配基不同点在哪里?Protein G HP 是没有穿透? 那么还是关注下结合域。  类型是G4? Protein G HP没有测流穿液的titer,不是没有穿透,蛋白是IGg1.2、收率低还是在于沉淀。 Elution 电导太低- -基本无缓冲能力,抗体不稳定。建议洗脱剂增加至20mM,同时增加
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 融合蛋白中的truncation指什么,有什么造成的? 38天前
    算是解决了吧
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 抗体药物的多聚体高 38天前
    1.取不同培养时间的发酵液,同样的亲和操作,看看聚体有没有变化趋势,就知道是不是培养过程中发生的了。2.merck新款填料,阳离子流穿模式使用,专门用于去除聚体
  • 小哈1120
    小哈1120  发布了新帖 亲和层析收率极低的原因 40天前

    分子type:单抗;pI:8.2缓冲液pH及电导如下:EQ buffer:pH7.3-7.4, 电导15 mS/cm,单价盐体系Unbounding wash:EQ bufferWash1:pH 5.5,电导:85 mS/cm,单价盐体系Wash2:pH 5.5,电导:4 mS/cm,单价盐体系Elution:pH 3.5,电导:0.4 mS/cm,单价盐体系RT:5min相关数据汇总疑惑点:1.检测 Titer所用柱子为poros A 20,上文中protein A所用柱子为MabSelect SuRe,载量未到20 mg/mL,收率极低!!比如实验3,流穿液里面仍能测量到titer,但为什么MabSelect SuRe捕获不了。2.洗脱液的pH大概为4.5左右,调节至pH5.5后,样品变

  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 亲和纯化蛋白低pH洗脱后,加Tris-HCl中和出现浑浊? 40天前
    每次中和到ph5.5时,浓度降低到初始浓度的一半,样品等电点是pI8.0,请问您用的什么缓冲液洗脱
  • 小哈1120
    小哈1120  回复了帖子 抗体纯化所用buffer体系? 40天前
    估计版主的意思是低ph灭活后,回调高pH用的tris体系的buffer。

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