登录| 注册

丁香客

选择模板

更多 最新动态

  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 我貌似买到假药了 191天前
    1、“国家315诚信牌品牌证书”这个是不是要找消协咨询下,或者直接问厂家,这个是谁颁发的,如果颁发虚假,可以考虑工商局或者市场监督管理局:虚假宣传。2、关于这个产品的描述,个人感觉是厂家走的擦边球,在明面上估计已经规避了法律风险,所以你找药监局肯定是不可靠的。而微商宣传这方面就更难了,要不然也不会有那么多做微商发家致富的。3、属于保健品不要紧,关键是也要有保健品文号或者相关的批准,你可以找下这个产品在“保健品”范畴是否有违法违规。4、最重要的:若不放心,最好不要用,也劝家人不要用。个人建议,其他的不必要折腾。(同意2楼)
  • 小兔杀手
    小兔杀手  发布了新帖 求助:需要一株X33毕赤酵母菌株 191天前

    感谢各位!      求一株X33毕赤酵母的标准菌株,因为主要是开展实验室重组蛋白表达实验,只要确定菌株确实是X33空白菌株就可以。之前尝试从生物风买了一株,但不知为什么就是养不起来,用自己配的YPD试过,买来的YPD(海博)也试过,划板长不起来。现在再求一株或者告诉下实惠可靠的购买途径。        再次感谢!

  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 病毒转染筛选后qPCR验证敲降90%,但western蛋白表达没变化 947天前
    Q-PCR基本等同与Northern,再确认好基因组中的目的基因情况,如果都确认过没问题,那么核酸水平的敲降就应该是确认的。WB的结果2个抗体都试过,差异不大且有重复,那么其结果也应是可信的,目的蛋白水平没有大的变化;可以使用Elisa进行重复确认,其灵敏度和双抗特异性可能有所提高。出现的原因推断:1、转录后调节了,可能是mRNA寿命延长、翻译增强、目的蛋白更新减弱等;2、这个蛋白在胞内是富集的且寿命很长,那么调整检测的取样时间可能会有差异;3、存在同源基因,在你的靶基因被敲低后,维持了同功蛋白的水平基本稳定;可以通过蛋白序列Blast去核实;4、抗体特异性不足,判定起来稍显吃力,可能要质谱。5、其他实验细节原因,这一点简单的排除方法就是换个老手帮你做下,看看结果是不是一致。我想到的可能就这
  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 CRISPR/Cas9基因敲入试验步骤(二)sgRNA的设计及退火 1255天前
    从实验技术上讲,现在普遍使用的CRISPR工作载体构建采用的是酶切连接方法,绝大多数采用的是BbsI、BsaI等位点,之后采用引物退火配对、连接的方法进行。如果已经建立了可靠的SOP,这个方法的问题不大,如果SOP不完善就会出很多小问题。主要如下:1、BbsI、BsaI内切酶稳定性不足,实际使用中容易导致载体切不完全的问题;2、引物退火效果不理想导致克隆阳性率低;3、连接配比不理想,转化效率低。因此,我强烈推荐基于重组整合方法设计的CRISPR载体,使用难度低,可靠性强,而且成本上也不会增加。其实验步骤分三步:1、使用XbaI、EcoI等其他稳定可靠的内切酶酶切载体,回收载体;2、使用PCR将靶点做到特定片段上,回收片段;3,重组整合反应,转化即可。
  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 01242013-Immunity-Review-IL2 1767天前
    厉害!
  • 小兔杀手
    小兔杀手  : 我刚刚在丁香通试用中心申请了一款Titertek-Berthold Colibri 超微量分光光度计试用装,觉得很不错,推荐大家也来申请吧。 http://dxy.me/iMZZzq
  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 超表达细胞,mRNA水平效果显著,但蛋白水平一直检测不到 1821天前
    可能的原因有很多,我猜测了一些,看看是不是对你有帮助。 1、获得该mRNA的模板细胞和你超标达细胞是不是同源,有没有排除内源的背景? 2、蛋白降解:翻译后的蛋白,可能因为细胞识别、蛋白互做、自身稳定性等原因被降解; 3、该mRNA翻译后的蛋白在细胞内有功能,受到细胞的负反馈调节抑...
  • 小兔杀手
    小兔杀手  发布了新帖 酿酒酵母表达问题 1860天前

    各位战友,求助一下酿酒酵母表达的问题。 使用酿酒酵母INVSc1,载体是pYES2,预期是胞内表达,目的蛋白是eGFP,密码子未优化 酵母菌株筛选使用invitrogen的说明书,最终表达使用YPD培养基,半乳糖诱导 现象:未见目的蛋白表达; WB检测(GFP ...

  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 培养基控制污染之杀菌剂 1999天前
    抗菌肽这个玩意儿我也不是很了解,貌似有些超级稳定,有些就不那么稳定,只是我们拿到的这个东西很稳定。 防霉剂是用来喷的,也可以添加到某些需要防霉菌的溶液里(要看用途),就是雾化喷剂一样的东西,不像甲醛有那么大后遗症。我们这边用的效果是很好的,前年夏天我们这边固体培养污染率大概在40...
  • 小兔杀手
  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 诱导绿色愈伤,可行? 2002天前
    十分感谢,我也来参考看看,
  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 诱导绿色愈伤,可行? 2002天前
    感谢战友提醒,这个红米、黑米的我倒是真没想过,主要是手上没有这两种愈伤。 病菌侵染时导致的响应应该是有可能的,我之前做农杆菌侵染的时候偶然碰到共培养培养基呈现深褐色,还有几次是遇到侵染后的培养产物(培养基成分)在-20℃存储一周后产生非常强的红色,不明所以,而且这种都是偶然碰...
  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 诱导绿色愈伤,可行? 2002天前
    想通过激素或者物理手段达到,如果添加简单的化合物也是可以接受的
  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 培养基控制污染之杀菌剂 2002天前
    我们用的这个抗菌肽效果还是可以的,可以高温灭菌,对于常见的细菌基本都能做到99%左右的杀灭,而且也不容易降解,培养基中添加量也不多。唯一的缺点就是不能和部分抗生素共用,我们也还没仔细测试不知道是不是所有的抗生素都拮抗,但对于青霉素是拮抗的。至于细胞毒性上,目前我们还没发现它对细胞...
  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 PCR产物纯化酶切,切不动 2002天前
    我是想会不会PCR片段中本来就含有这两个酶切位点,如果本来就含有,那酶切后自然是连接不进去的。
  • 小兔杀手
  • 小兔杀手
  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 PCR产物纯化酶切,切不动 2006天前
    检查下PCR片段中有没有这两个酶切位点(酶切后跑个电泳看看切后的条带有没有变化) 可以将酶切后的PCR片段送测序,看看末端是不是真的没切开
  • 小兔杀手
    小兔杀手  回复了帖子 植物中DNA与植物中RNA反转录成cDNA有区别吗 2006天前
    可不可以用取决于你的目的。一般情况下是选择表达量较高的(常规是10倍以上才算是超表达),但像dongguo介绍的案例一样,致死性的基因,可能选择表达量低一些可能会比较好。 转基因植株之间是存在差别的。如果你是用农杆菌介导,那转进去的部分就是随机整合,而且拷贝数也有随机的成分,整合...
  • 小兔杀手
    小兔杀手  : 诱导绿色愈伤,可行? http://dxy.me/ueaIJr 突然想到一些问题,请教下各位战友: 1、将本不含成熟叶绿体的愈伤组织诱导成含成熟叶绿体的愈伤组织,可有办法? 比如常规的水稻组织是成淡黄色的,能不能诱导成绿色(生成叶绿素)? 2、进一步联想,能不能在...

关于我们|联系我们|版权声明|资格证书|丁香志|加盟丁香园|友情链接 丁香园旗下网站: 丁香园|丁香通| 人才|会议|药学|博客