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  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 从试剂公司购买的质粒是否能自己转染慢病毒呢 2天前
    如果你打算慢病毒转染需要构建载体,这个费用会高很多,一般都会选择瞬时转染,我们楼上实验室刚用RFect siRNA转染了cos-7细胞,好像目前为止实验进展还挺顺利。 
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 肝正常细胞HL-7702转染效率不高,怎么调整 34天前
    看荧光情况好像转进去的不多,楼主有没有再用其它方法检测?看荧光只能作为参考,而且观察荧光最好是转染后的4-6小时,最好还是用48h后qPCR检测或者72h后蛋白水平检测。我们课题组在做完RFect 转染后都用48h后qPCR水平检测。
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 如何从石蜡切片中提取DNA? 41天前
    我这有个BIOG DNA FFPE Tissue Kit的说明书希望能帮到你们 http://dxy.me/nJwLgW
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 ​如何对毛发进行DNA提取 41天前
    您没有权限阅读该帖子
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 石蜡组织DNA提取 42天前
    QIAamp DNA FFPE Tissue Kit,BIOG DNA FFPE Tissue Kit都可以,如果你们课题组的经费足够也可以选择进口试剂
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 【求助】紧急求助DNA提取含量问题 42天前
    我这有个BIOG DNA FFPE Tissue Kit的说明书希望能帮到你们
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 石蜡包埋组织DNA提取 42天前
    楼主也可以试试离心柱法和磁珠法,我们楼上实验室用BIODAI离心技术提取到的DNA,纯度要比磁珠法高,而且磁珠法的样本处理成本较高,或者楼主可以优化一下实验条件再试试
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 慢病毒转染悬浮细胞相关实验 48天前
    悬浮细胞本身会比那些贴壁细胞难做很多,我看到有同学24小时后的观察,这个时间肯定太长了啊,可能部分荧光已经猝灭了,导致看到没什么绿点。我们实验室用DEOFECT EU转染后选择48h小时后用qPCR水平检测 ,楼主用什么方法检测转染效率
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 invitrogen Lipofectamine™ 2000的siRNA和DNA转染说明 90天前
    有些细胞自身很难转。一般转染后6小时就可以观察荧光了,如果时间间隔太长,会导致了荧光淬灭。我们实验室在做完RFect siRNA转染后基本选择48h小时后用mRNA水平检测 。楼主可以在48h小时后用mRNA水平检测,或者72h后蛋白水平检测,毕竟观察荧光效果只能作为一个参考。
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 血清、血浆microrna表达一致性问题 90天前
    血清和血浆样本提取microrna的得率跟样本量、洗脱体积有关,一般来说用Qiagen、BIODAI方法得率都差不多,50微升洗脱体积可以用Qbit测到5-20ng/ul的读数,浓度稍低也没关系,关键还是看pcr检测结果,毕竟浓度太低测到的读书也没有参考意义,还是要以pcr检测结果为准。 
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 提取血清microRNA,怎么保存标本?直接放在-80?还是抗凝后放入?或是分离后在放入? 114天前
    听我师姐说他们的直接优化了BIOG的裂解液和洗脱液,从尿液沉淀细胞中分离提取出DNA,然后用于后续核酸检测的使用
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 同时转染两个质粒shRNA可以吗? 245天前
    可以共同转染,也能分开转染,看楼主课题组的选择了。我们课题组遇到需要干扰两个基因的时候用RFECT PLASMID DNA TRANSFECTION REAGENT分开转染,弊端就是开支会比共同干扰要高,楼主课题组的经费情况我感觉只能共同转染了,那你们需要考虑的因素就要再多一点
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 关于慢病毒转染实验后期处理 257天前
    楼主可以用甲醇洗,甲醇是可以固定细胞的,做免疫荧光时冷甲醇就有固定和打孔的作用,出来的照片很清楚,荧光也特别好,如果楼主不止单纯用来拍照荧光,还要后续还要做实验,建议不要使用甲醇洗,对细胞多少会有伤害。楼主是转染后多久观察荧光的?最近我们实验室用RFECR转染法转染的A549细胞后6小时观察荧光,看到的荧光还挺多,但是需要注意,转染后时间不能间隔太长,不然荧光容易猝灭 
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 pEGFP转染Raw后始终无荧光 273天前
    无荧光有可能没有转进去,但是不能完全表示没有转进去,毕竟荧光只能作为参考,48h后收细胞做个mRNA水平检测吧。我们用24孔板做的,每孔1ug质粒,设置质RFECT PLASMID DNA TRANSFECTION REAGENT2ul,3ul,4ul三个梯度,每个梯度做2个复孔,DNA 和转染试剂的比例是1:2。用来稀释siRNA和稀释转染试剂的培养基必须是无血清培养基,因为血清的存在会影响转染效率
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 病毒转染HepG2遇到的麻烦和问题 273天前
    western 蛋白水平检测结果不好不代表qPCR基因水平检测也不好,楼主有没有用48h收细胞做qPCR基因水平检测,我们实验室用RFECT,SIRNA技术转染后首选48h收细胞做qPCR基因水平检测,希望能帮到楼主。
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 siRNA沉默HepG2细胞中某个microRNA表达 274天前
    首先需要细胞的培养,然后设计目标siRNA再合成,细胞的转染是整个实验的关键,一般我们实验室在做完RFECT,SIRNA转染后都会在6h小时先观察荧光情况,最后转染后48h收细胞做qPCR基因水平检测,也有很多实验室转染后72h收细胞提蛋白做western Blotting蛋白水平检测。
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 hepG2细胞转染 275天前
    悬浮细胞本身会比那些贴壁细胞难做很多,24小时后的观察hepG2是不是时间太长了啊,可能部分荧光已经猝灭了,导致你看到没什么绿点。我们实验室用DEOFECT EU转染后选择48h小时后用qPCR水平检测 ,楼主观察完荧光后有没有再用基因检测方法进行检测?
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 HepG2转染相关问题 275天前
    这个DNA和脂质体剂量要具体看用的什么试剂吧,还有要看是用的多少孔板做的,我们用的24孔板,每孔1ug 的DNA,设置了rfect 2ul,3ul,4ul三个梯度,每个梯度做了2个复孔,DNA 和rfect的比例是1:2。一般做转染前一天铺板,使做转染前细胞密度在40%左右。转染后48h收细胞做qPCR基因水平检测或者转染后72h收细胞提蛋白做western Blotting蛋白水平检测。
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 HepG2转染的相关问题 275天前
    转染24小时观察荧光时间太长了,可能部分荧光已经猝灭了,我们实验室都做转染时将siRNA 稀释液与RFECT稀释液混合,铺板在40%左右 。转染后4-6h就开始观察荧光了,时间不能太长,荧光容易淬灭,然后48h小时后mRNA水平检测  
  • 妞妞sister
    妞妞sister  回复了帖子 求助,过表达质粒转染浓度问题! 276天前
    说明书上应该会标明用量,,楼主用的多少孔板做的?我们用的24孔板,每孔1ug 的DNA,设置了RFect 2ul,3ul,4ul三个梯度,每个梯度做了2个复孔,DNA 和RFect的比例是1:2。一般做转染前一天铺板,使做转染前细胞密度在45%左右。转染后48h收细胞做qPCR基因水平检测。 

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