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戒爱锁心笑看红尘

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求教:怎么将荧光蛋白写好

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【求助】上海哪里有用分子筛做hplc测纯度的?

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  • 大西米
    大西米  的帖子被加了1分 75天前

    回复:单链抗体稳定性研究

    楼主的缓冲液为什么是柠檬酸和生理盐水啊?给我的感觉是制剂配方都没选好就开始做高温了。那你相当于存放条件等等都没考虑。而且检测项又只有sds、SEC和CIEF。CIEF里面看到了每个峰的变化,但是没看到主峰是否有飘。我感觉分析方法不是特别稳定。那是不是可以推测,你的活性方法做稳定了...
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 肿瘤是怎么转移的? 88天前
    您没有权限阅读该帖子
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 单链抗体稳定性研究 93天前
    楼主的缓冲液为什么是柠檬酸和生理盐水啊?给我的感觉是制剂配方都没选好就开始做高温了。那你相当于存放条件等等都没考虑。而且检测项又只有sds、SEC和CIEF。CIEF里面看到了每个峰的变化,但是没看到主峰是否有飘。我感觉分析方法不是特别稳定。那是不是可以推测,你的活性方法做稳定了没?到底是结合活性差了很多还是其他活性差了很多。没说清。 所以只能从两方面来分析,一是一级结构,二是高级结构。一级结构也就是上面很多人说的,各种修饰如氧化,糖等等。高级结构只能分析免疫表位了。这都没有特别专注的点。有的生物制品本来就不适合放这么高温的,活性降了是很正常的,而且还是这种配方下,甚至有的外观什么的都直接变了。所以你要分析那么深入要花大钱的。还不如先做做制剂配方,再考察各种配方下的稳定性再说。这种什么什么修
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 产品调研分析报告(旧帖整理)! 124天前
    我想请教下楼主,这些数据是出自哪里?
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 「女婴错输2天药物」协商未果:家属索赔75万,医院要依据 134天前
    首先我是闲的,申明我不是医生。但我觉得输错了,是处方开错了还是护士拿错药了?这个家长是可以看的啊。家长没有监护责任吗?第二条,赔这么多感觉是不合理的,但是家长一开始也不是为了要赔偿才来看病的,双方应该和气些协商把孩子病看好才重要。钱赔多赔少不是关键。第三,真的要赔偿,也不该全是钱能解决吧。好好商量下。
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 没有化验单,我们就不能不会诊断了吗? 134天前
    主任就是主任。保护自己的同时,更应该提高自身的水平。借助工具无可厚非。但是不能丢了传统。病情复杂,不能只是看检测结果就可以了。
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 单抗 非还原电泳 主带下方120kD 杂带成因 讨论。 157天前
    其实和亚型真的没太大关系。IgG1也这样。煮或者不煮都不够稳定的。
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 抗体杂质检测项中的HCP残留酶联免疫检测方法专属性怎么验证? 158天前
    哇,被版主认可,我很荣幸啊。
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 单抗 非还原电泳 主带下方120kD 杂带成因 讨论。 158天前
    70℃+IAM和没+IAM,蛋白量是一样的,但是条带粗细是明显不同的。 楼主这个现象你觉得该如何解释呢?我跑电泳尤其是抗体的时候非还原电泳一直跑不出稳定的状态,尤其是量多的时候。但是我没有CE-SDS,无法做比对。但我一直不觉得是HHL的原因。我一直以为是结构的原因导致迁移率不同。非还原时,加了SDS,煮过之后,其实抗体有的并不能完全打开成直链状(感觉),而且同一蛋白量条件下,非还原的条带细于还原状态的。是不是可以理解为有部分蛋白没有被染色上?还是漏掉了呢?如果说是没有被染色上,那原因是不是就是因为结构没打开呢?我只是瞎猜猜。我都不好意思说,我大分子的非还原的电泳一直跑不好。
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 2-AB 糖谱分析出峰,异常情况咨询 225天前
    标记后纯化效率不高,糖回收太低,导致基线不好看。楼主得调整洗脱方法。我们做的时候在G0F后面多出来的是Man5。当时做的时候分离度不是特别好,特别容易出现。而且如果是一批处理,出现这种情况,基本上推断为样品问题。我们用Sigma的试剂盒,冷冻干燥,还没遇到过处理过程影响糖的。
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 原液有沉淀,放行还是不? 227天前
    其实对于放行不放行,应该是看过程的。还有就是关键质量属性。对于蛋白来说,确实是很容易沉淀。需要评估产生沉淀的原因,后果,评价其风险。根据风险才能决定放不放行。这个和质控部门应该没关系。还有这个批间一致,是每批都会产生沉淀的意思吗?这每批都沉淀,原液稳定性过的了吗?破坏性实验不做的吗?
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 肽图检测细节问题及方法学验证 228天前
    肽图分析我是这样考虑的:1、因为它是定性分析,所以肉眼比对一下,看看是否一致。通常无关抗体或者蛋白,其实峰形有很大不同的。不会是一点点的小峰有差异,就说它不是我的目标蛋白了。所以用它来区分不同项目的定性效果是非常好的。这个当放行的时候也是可以一眼分辨出来的。2、当做方法开发的时候,根据规定是需要对每个峰进行鉴定,然后才能确定特征峰。那么就必须连接ms,把特征峰定出来。通常用的特征峰抗体就是CDR区。然后做多了之后就加上保留时间,峰面积等等。usp上有几个品种,定的保留时间是±0.03。但是我通常做不到。如果加上峰面积,我觉得我就更做不到了。3、关于肽图,其实用处太多,比如看残留HCP含量,或者修饰变化。如果是放行,我觉得只能把它用来区分不同蛋白。目的不同,用处不同。不用太纠结,到底怎么数字化
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 中美IND申请区别-----CMC部分讨论 411天前
    你说的都要在GMP下生产,是不是说注册申请样品,也需要在GMP条件下生产?
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 抗体杂质检测项中的HCP残留酶联免疫检测方法专属性怎么验证? 1359天前
    既然分子量小的那部分蛋白免疫原性太差,很难产生抗体,那么换句话说,在人体内也很难产生抗体,就可以不做为有害物质考虑了。    空载的CHO细胞纯化出来的HCP蛋白,确定是和实际构建且纯化时是一致的么?蛋白之间的相互作用不用考虑了么? 检测毕竟是辅助手段,在源头
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 关于中国药典蛋白类药品的疑问 1647天前
    这个异构体也要看什么活性的,万一是毒性呢? 而且我觉得纯度这个太难分析了,还不如直接限定毒性物质的量来的靠谱。
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 关于中国药典蛋白类药品的疑问 1648天前
    蛋白的纯度本来就很难界定。而且就如现在的药典,sec也没有规定上多少量,多少浓度,什么色谱柱。而且蛋白药物的均一性或者说异质性。这个毒理怎么说,且这个工艺稳定性怎么说?都没有看到相应的规定。类似的标准依据都没有看到。
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 糖基化要纳入单抗标准吗 1756天前
    糖基化我认为应该要纳入标准的。原因是作为一个药物必须是稳定的,糖基化稳定也是药品质量稳定的基础。至于每种糖基该控制多少量,这就是每个品种的事了。
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 为什么转模之后膜上没有蛋白? 2298天前
    我觉得你可以将转完膜后的page胶,再染个色看看是否有蛋白,这是一点。第二点,如果pvdf膜在对应的地方有白白的东西,其实也是转上了,只是丽春红染不上。而且如果丽春红染不上,一是膜的状态不对,或是没泡过甲醇,或是泡过干掉了。再或是,蛋白不正常。
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 从招聘启事说起 2298天前
    还是要多一点正能量,多看一点好的地方,管理者也会心胸开阔一点,事情进行的顺利一点。太完美了,手下的人压力也大的。不是么?
  • 大西米
    大西米  回复了帖子 抗体产业更依赖工艺优化还是细胞株、培养基改良? 2298天前
    细胞培养过程中无论是培养基、培养工艺(PH/DO/TIME),甚至搅拌桨的设计都会影响抗体的质量 这句话太感同身受了。 老师,可有改进的大致方向??

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