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请教这个小序列究竟是什么?

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急救:钓取羰基还原酶基因

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  • 大南
    大南  回复了帖子 关于GFP发光的问题 77天前
    观察到有GFP荧光的条件是,1是要GFP足够多,2是激发光要足够强,3是GFP要处于合适的环境,由于检测发射光的只是个光电倍增管,不是应用于化学发光积累信号的雪崩式光电二极管,所以时间积累对于光电倍增管没有用。也就是你所谓的曝光时间对GFP检测没有用。
  • 大南
    大南  回复了帖子 求助:内参做不出来 365天前
    换吧,大部分内参抗体不贵的
  • 大南
    大南  回复了帖子 【求助】各位老师,核蛋白内参Histone,选哪个型号比较好 365天前
    我实际做了是这样的,H1比较少,H4不常用抗体少些,做内参认可度差,H3抗体一般都较强,本身H3蛋白也多,所以条带会很粗,不好看,H2A用的不错,蛋白本身含量和抗体灵敏度都合适,条带会好看些。另外还要关注样本是什么,比如细胞裂解液上清中H3也可检测到,但是识别组蛋白修饰的抗体就不适合用上清做样本。
  • 大南
    大南  回复了帖子 求助,WB内参不齐,显不出来? 421天前
    1染个考染给我看看2样本是什么告知下
  • 大南
    大南  回复了帖子 求助:内参曝不出但目的蛋白能曝出且有趋势 421天前
    脂肪组织内参用GAPDH,样本处理要清澈,样本跑胶要条带清晰,你做个考染给我们看看,我实际操作感觉内参会有一小部分不太均一,差别一倍左右,曝光深了看不太出来😜
  • 大南
    大南  回复了帖子 求助:内参做不出来 421天前
    肝脏就这样,正常的,请换vinculin即可,ACTIN,GAPDH都这问题,不稳定。我亲自从头到尾的取样速冻到裂解定量才能将ACTIN GAPDH做得好,新手操作有耽搁或不到位就这样。
  • 大南
    大南  回复了帖子 为什么我从癌组织中提取的DNA都是降解的,而从癌细胞株里提取的不降解? 421天前
    别怕,你实验很正常,组织DNA和细胞DNA抽提的典型结果就是你这样的,细胞一般就是中间一堆,组织有三种,高分子量到低分质量的分布分别是,高多低少,高低基本一致,低多高少。我都遇见过,有人凭理论觉得高多低少最好,实际我遇见过很多情况是和组织本身健康状态,取样手段,操作时间长短都有一定关系。不能单纯指责自己操作有问题,这3种样本后续实验一般没有太大差异。祝顺!
  • 大南
    大南  回复了帖子 关于基因重叠拼接 564天前
    直接两个产物pcr, 不放引物光是模板。然后按分子量胶回收产物,按照全长序列两端引物再次pcr
  • 大南
    大南  回复了帖子 PAGE杂带 564天前
    加大上样量就好了。另外先试试降低pcr模板量。
  • 大南
    大南  回复了帖子 什么染料只染细菌,不然别的细胞 565天前
    细菌和细胞物理上大小差距很大,为何要用染料识别?FSC SSC你测了做对比没?
  • 大南
    大南  回复了帖子 一篇老板未发表意见就淘汰的综述 565天前
    多谢战友分享,说的很系统明确。
  • 大南
    大南  回复了帖子 胆盐水解酶水解甘氨脱氧胆酸钠 1489天前
    去垢剂啊,水溶液,做好本底解离的对照
  • 大南
    大南  回复了帖子 为什么我的pvdf膜曝光后有这么多的黑点 1490天前
    1 容器 buffer 清洁程度差 2 荧光二抗干扰物质多,尤其是实验室物品乱用的情况,分子生物学染DNA的很多都干扰二抗 3 封闭buffer不均一,尤其是使用奶粉的时候 4 你目的条带信号差,使本底较弱的信号提高 5 转膜时的一套东西都不干净
  • 大南
    大南  回复了帖子 呼叫万能的园子:膜蛋白做western条带位置不对问题。 1490天前
    分子量是金标准,但是marker不是,尤其是预染marker会有偏移,影响因素是buffer,胶的种类等,一般是大分子量的位置偏移厉害,一般参考相同的阳性内参即可。至于位置不同要具体问题具体分析,结合实际情况判断。一般如果序列相同的蛋白,不同细胞或者组织或者来源不同,修饰不同,会...
  • 大南
    大南  回复了帖子 带His标签的蛋白挂不上柱 1491天前
    我以前每次都重新挂Ni再用,你脱Ni再挂Ni了么? GE的Ni柱挂His本来就不是特别强,Qiagen的强
  • 大南
    大南  回复了帖子 BSA封闭 1491天前
    进口roche好,但是进口的牛制品不稳定,现在好像禁了,进不来。 换国产的吧,有两种 一种是BSA,一种是BSA Fraction V,后者更纯净点。价格差异不大。 浓度么,2-5% 时间大于0.5小时,不过夜就行(有时候过夜也行)
  • 大南
    大南  回复了帖子 tricine sds page 组织样品 呈现倒“U”,请教 1491天前
    相信我,把样品稀释一个系列,然后做WB,然后你会挑到较合适的上样浓度和上样量的 不要偷懒,我觉得30ug上样(样品稀释一倍,上样体积不变)应该可以得到较为满意的结果
  • 大南
    大南  的帖子被加了1分 1497天前

    回复:【求助】请教如何鉴定一个混合培养中各种细菌的比例?

    无必要,也难测,取样后必须直接固定,难操作。一般是确定起始端比例工艺,中间段控制指标,最终产物得率来固定一个发酵的工艺,研究中间段的混合菌比例只是发发文章吹吹牛,要测也是测发酵中间段的有机物无机物的指标和流加补料策略。若要说比例,一般迅速无营养buffer梯度稀释后涂布比较好,混...
  • 大南
    大南  的帖子被加了1分 1497天前

    回复:【求助】发酵罐采购,大家帮我参考一下是选择infors还是nbs

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  • 大南
    大南  的帖子被加了1分 1497天前

    回复:【求助】怎么用酶标仪测菌浓度

    问题1:加样量 最适是200ul吗?实验时,发现加200跟加300数值差别有点儿大。每个孔板都有体积,一般平底的3599板就200ul,多了在使用酶标仪震板功能时会溢出来,明显你测OD600菌悬液是需要震板的。问题2:加样浓度 OD600最好不要超过多少?跟我一起的同学,测的数值...

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