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  • 夏雨_
    夏雨_  加入了调查派 478天前
  • 夏雨_
    夏雨_  回复了帖子 [求助]急求细胞提蛋白的步骤!!! 625天前
    尽量别冻那么久吧,谁也不能保证你的结果能可靠
  • 夏雨_
    夏雨_  回复了帖子 [求助]急求细胞提蛋白的步骤!!! 636天前
    吸干PBS之后,尽可能的吸干点,然后套上密封袋放负八十保存,这样还有利于裂解,但是别冻太久了,磷酸化最多冻一个小时,其他加样时间点的尽量别超过一天。
  • 夏雨_
    夏雨_  : 我刚刚在丁香通试用中心申请了一款临床级无血清非程序细胞冻存液试用装,觉得很不错,推荐大家也来申请吧。 http://dxy.me/7FVfaa
  • 夏雨_
    夏雨_  回复了帖子 [求助]急求细胞提蛋白的步骤!!! 842天前
    你好,是吸干PBS之后直接放-80 吗?需要做什么处理不,我想几个样品放一起提蛋白
  • 夏雨_
    夏雨_  : 我刚刚在丁香通试用中心申请了一款RTCA S16实时无标记细胞分析仪-检测细胞粘附、增殖、毒性试用装,觉得很不错,推荐大家也来申请吧。 http://dxy.me/AzEFbi
  • 夏雨_
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  • 夏雨_
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  • 夏雨_
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  • 夏雨_
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  • 夏雨_
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  • 夏雨_
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  • 夏雨_
    夏雨_  回复了帖子 消化道平滑肌细胞原代培养过程中如何区别所培养的细胞是平滑肌细胞还是肌成纤维细胞? 1003天前
    请问前辈这个消化法用的什么酶,是I型胶原酶还是胰酶,还是两者都用了,哪个效果能好一点呢?我最近在做气道平滑肌原代细胞培养,但是贴壁法的似乎好难长出来,想试试消化法。谢谢!
  • 夏雨_
    夏雨_  回复了帖子 怎样进行气道平滑肌的原代培养? 1011天前
    您好前辈,请问您的细胞养的怎么样呢?我也是刚开始养气道平滑肌细胞,感觉自己也是剥离的很不彻底,稍微一弄感觉就会把气道损伤了,几乎也都是不透明的,请问这样会有影响吗?现在还没有细胞爬出来,都养了好几次了,前两次都是以污染结束扔掉了,是是在最先漂洗的PBS里面要加双倍剂量的双抗啊?因为我之前都没加。
  • 夏雨_
    夏雨_  回复了帖子 如何做好小鼠气管平滑肌细胞的原代培养 1011天前
    你好,我现在也开始养小鼠气道平滑肌细胞,请问你现在养的怎么样呢?能否给我做一下指导呢,养了两次都没有成功。培养基需要高糖的吗?我现在用的是20%FBS的DMEM培养基,还用换成高糖的吗?还有用PBS洗的话,里面必须加双抗吗?你的培养基里有没有加双抗呢?感觉自己做到不污染真的太难了。
  • 夏雨_
    夏雨_  回复了帖子 气道平滑肌原代培养 1012天前
    还有我的小鼠是不是做的太小了,感觉昨天杀的时候它毛都没有长好啊。是不是该选取十周以上的小鼠,我做的是BALB/c
  • 夏雨_
    夏雨_  发布了新帖 气道平滑肌原代培养 1012天前

    大家好,我现在在做小鼠气道平滑肌细胞原代培养,因为没有师姐带,自己的操作都不知道对不对,已经分了两次,但都是以污染告终,细胞养不好,实验也没办法做,恳请前辈们的指导!谢谢,关于取材方面和剥离组织方面,我该注意些什么,感觉自己什么都做不好,真的挺闹心的,恳请前辈给出具体的指导!我是用贴壁法培养的,昨天下午刚分的细胞,但是今天早上来时看就已经变黄了,而且可以看到移动的不明生物 然后就扔掉一盘,另外一盘还没有出现类似情况,但我觉得也不能幸免。我的操作是:先处死小鼠,再在75%酒精中泡大概5分钟,然后取气道,可能手法不熟练,在预冷无菌PBS中快速漂洗两三遍,洗去血液,再转入超净台中操作。再漂洗几遍后,进行剥离外层结缔组织,(因为做的是6-8周小鼠,感觉好小只,气道好小,所以可能有损伤气道嫌疑),然后

  • 夏雨_
    夏雨_  回复了帖子 请教关于小鼠气管平滑肌的培养 1012天前
    你好,前辈。我现在也在做小鼠气道平滑肌细胞原代培养,因为没有师姐带,自己的操作都不知道对不对,已经分了两次,但都是以污染告终,细胞养不好,实验也没办法做,恳请前辈的指导!谢谢,关于取材方面和剥离组织方面,我该注意些什么,感觉自己什么都做不好,真的挺闹心的,恳请前辈给出具体的指导!
  • 夏雨_
    夏雨_  回复了帖子 请问谁能帮我看看图中的细胞是不是气道平滑肌细胞 1012天前
    你好,前辈。我现在也在做气道平滑肌细胞原代培养,因为没有师姐带,自己的操作都不知道对不对,已经分了两次,但都是以污染告终,细胞养不好,实验也没办法做,恳请前辈的指导!谢谢,关于取材方面和剥离组织方面,我该注意些什么,感觉自己什么都做不好,真的挺闹心的,恳请前辈给出具体的指导!
  • 夏雨_
    夏雨_  回复了帖子 气道平滑肌细胞的培养 1012天前
    你好,前辈。我现在也在做小鼠气道平滑肌细胞原代培养,因为没有师姐带,自己的操作都不知道对不对,已经分了两次,但都是以污染告终,细胞养不好,实验也没办法做,恳请前辈的指导!谢谢,关于取材方面和剥离组织方面,我该注意些什么,感觉自己什么都做不好,真的挺闹心的,恳请前辈给出具体的指导!

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