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  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 49天前
    具体组织细胞特异性敲除小鼠的敲除鉴定涉及实验组别设计,基因型鉴定引物设计等一系列的问题与实验,一下子在这里说不清楚,还是具体问题具体分析吧。更多基因工程小鼠模型的文献或实验问题,请告知实名加单位添加我的微信18911466919周效华进一步解答吧,这里不方便发送文献及资料,每天咨询的人比较多,还请理解,谢谢。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 111天前
    不客气,战友。更多基因工程小鼠模型的文献或实验问题,请告知实名加单位添加我的微信18911466919周效华进一步交流解答吧,这里不方便发送文献及资料,每天咨询的人比较多,还请理解,谢谢。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】Cre/CreERT2和floxed小鼠繁育的科学由来(文末有系列学术讲座PPT兼答疑) 118天前
    战友你好。你的问题并不复杂,可能你有一些小误解。只要我们捋顺所涉及到的基因工程小鼠模型历史与原理,问题就迎刃而解了。你的问题涉及三种基因工程小鼠模型,名称及原始文献及文献中设计策略截图分别如下及附件:请一定先看过此答疑文末的的设计策略截图后再往下阅读。1. 2001年科学家用定点插入技术之一胚胎干细胞基因打靶技术(tm)研发的R26-LSL-EYFP黄色荧光报告小鼠;2. 2002年科学家用随机转基因技术(Tg)研发的Prx1-Cre工具小鼠模型;3. 2009年科学家用随机转基因技术(Tg)研发的Prx1-CreERT2-EGFP工具绿色荧光报告小鼠模型。问题1:Prx1-CreERT2-EGFP工具绿色荧光报告小鼠模型答:快速答案-你有误解,文献没错。详细答
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 120天前
    基因工程小鼠模型饲养繁育遗传概率计算,需要一方面考虑孟德尔遗传定律,另一方面考虑不同基因工程改造技术对所涉及到的基因工程小鼠模型修饰情况的影响,特别是要能够区分好随机转基因技术Tg与定点基因工程改造tm/em技术的区别。比如你所繁育(Gene f/f,Cre) X (Gene f/f,+),假定你的Gene f/f是常规的定点改造,那针对这一基因型概率是100%都是f/f,如此只要考虑另一基因型。假定你的Cre也是定点改造,那就要分是纯合子还是杂合子:纯合子,子代都是杂合子;杂合子,子代的确是50%是杂合子,50%是野生型。假定你的Cre是随机转基因,情况就比较复杂了,具体要看是否有文献报道弄清楚了插入位点情况以及上一代繁育方式情况:你所言50%是只有一个插入位点,且上一代就是与野
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 126天前
    战友你好!最严格的对照是GeneX flox/flox; Cre阴性基因型小鼠,实验及文章发表必须要有的数据,其他补充数据对照组包含GeneX flox/+; Cre阳性基因型小鼠、GeneX +/+; Cre阳性基因型小鼠(在遗传背景为C57BL/6、鼠龄、性别等条件一致的情况下,等同于Cre阳性小鼠)、GeneX +/+; Cre阴性基因型小鼠(在遗传背景为C57BL/6、鼠龄、性别等条件一致的情况下,等同于野生型C57BL/6小鼠)。更多基因工程小鼠模型的文献或实验问题,请告知实名加单位添加我的微信18911466919周效华解答吧,这里不方便发送文献及资料,每天咨询的人比较多,还请理解,谢谢。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 132天前
    直接下载即可,如果下载不了,更多基因工程小鼠模型的文献或实验问题,请实名加单位添加我的微信18911466919周效华解答吧,这里不方便发送文献及资料,每天咨询的人比较多,还请理解,谢谢。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 132天前
    原理是:一般情况下,发育生物学上,小鼠鼠尾组织与研究感兴趣的特定组织细胞是由同一个受精卵发育而来的,故而选择了取材方便而不损伤处死小鼠的方式来进行基因型鉴定,indicate特定的组织细胞基因型。当然,这里面如何能很好的理解这个indicate背后的情况,需要结合对基因工程小鼠模型的研发原理结合实际问题,才能很好理解清楚。更多基因工程小鼠模型的文献或实验问题,请实名加单位添加我的微信18911466919周效华解答吧,这里不方便发送文献及资料,每天咨询的人比较多,还请理解,谢谢。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 167天前
    flox/+;某某Cre阳性基因型小鼠,一般没有敲除的效果。因为理论上,两条同源染色体中只有一条上的目的基因被在某某特异性组织或细胞中敲除,很多时候另一条上的目的基因是可以继续转录翻译的。说一般,就是说存在特殊的情况。的确,目的基因在X染色体上时,如果此小鼠是雄性个体(flox/Y;某某Cre阳性)的情况下,或雌性个体基因型WT那条X染色体目的基因X被失活的情况下(flox/X目的基因失活;某某Cre阳性),这两种情况下,都会出现特殊的有敲除的效果。更多X-inactivation知识请阅读:X-inactivation (also called lyonization) is a process by which one of the copies of the&nbs
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 214天前
    战友你好!你的问题,已经在微信中和你解答过,更多请在我的微信18911466919周效华告知实名加单位解答吧,这里不方便发送文献及资料,每天咨询的人比较多,还请理解,谢谢。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】Cre/CreERT2和floxed小鼠繁育的科学由来(文末有系列学术讲座PPT兼答疑) 214天前
    战友你好!你的问题,已经在微信中和你解答过,更多请在我的微信18911466919周效华告知实名加单位解答吧,这里不方便发送文献及资料,每天咨询的人比较多,还请理解,谢谢。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 241天前
    战友您好!你的问题,已经在微信中和你解答过,更多请添加我的微信18911466919周效华告知实名加单位解答吧,这里不方便发送文献及资料,每天咨询的人比较多,还请理解,谢谢。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 241天前
    战友您好!你的问题,已经在微信中和你解答过,更多请添加我的微信18911466919周效华告知实名加单位解答吧,这里不方便发送文献及资料,每天咨询的人比较多,还请理解,谢谢。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 Science:CRISPR热潮(中文翻译,附英文原文) 254天前
    CRISPR技术加快了基因工程动物模型研究的历史进程http://dxy.me/BVnequ;条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略Mating Strategy forConditional Knock-Out (flox) Mouse
  • 周效华
    周效华  的帖子被加了1分 254天前

    Science:CRISPR热潮(中文翻译,附英文原文)

    Science:CRISPR热潮科学家们有望利用一种细菌免疫机制开发出**性的新型基因组编辑技术(genome-editingtechnique)。细菌虽然不会对我们真核生物产生太多的同情之心,但是它们也的确是会生病的。而且细菌得病也不是和我们人类毫无关系的,至少就会对乳制品业带...
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 遇不到爱情的女博士 262天前
    课题研究有意思,细胞实验表型无差别,动物实验表型有差别,为你和你导师对研究的勇气与信心点赞。期待未来拜读一下你们的文章,无差别有差别的数据都分享一下哦,有意思。PS:关于爱情,可以自发组织或积极参加一些学术交流活动或会议,真爱应该很快会出现。加油💪
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】Cre/CreERT2和floxed小鼠繁育的科学由来(文末有系列学术讲座PPT兼答疑) 269天前
    谢谢收藏。欢迎推荐。有问题多多提问,更多欢迎实名加单位添加我的微信18911466919周效华或电话我进一步交流。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 276天前
    不客气,战友。希望对你有帮助。精力有限,丁香园暂时分享的帖子还很少,更多请实名加单位添加我微信18911466919周效华交流吧。谢谢理解。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 359天前
    条件性基因敲除大鼠模型之所以在历史上几乎看不到,是有一些技术难度原因的——1. 早期所有定点基因工程动物模型研发,主要集中在小鼠模型上,得益于2007年的诺奖技术:ES细胞打靶,1985~1987年的这三位科学家(下图1,2007年诺奖)的工作,让全身基因敲除小鼠首先实现、再加上Cre-loxP等类似调控系统的引入,Cre等工具小鼠的积累,条件性基因敲除小鼠也得以实现。但大鼠的情况恰好相反,大鼠的ES细胞分离建系一直没有像小鼠那样成功(事实上,小鼠的ES细胞分离建系最早起也是在129系列的近交系上建立成功,没有能在C57BL/6这个最常见的基因工程动物模型的近交系上获得成功),于是相应的一系列全身基因敲除大鼠、条件性基因敲除大鼠都没有能够像小鼠一样发展起来。2. 2011
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 391天前
    战友您好!会的,这也是条件性基因敲除小鼠通过繁育转化为全身基因敲除小鼠模型的常见策略之一:生殖细胞表达Cre小鼠繁育。是否纯合取决于您是将这样的小鼠自交还是与WT小鼠交配,自交存在这种可能性的。更多欢迎实名+单位添加我的微信18911466919周效华进一步交流,获取原始文献或PPT等资料。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 403天前
    1. 狭义上,转基因小鼠特指随机转基因小鼠,广义上,转基因小鼠泛指所有基因修饰小鼠;2. 首先确定手里的Cre工具小鼠到底是随机转基因(Tg)还是定点敲入小鼠(KI,tm),这与是否有特定启动子无关,与原始文献方法有关;3. Tg通过普通PCR的genotyping无法判定纯合子小鼠,杂合子小鼠,原因是位置不确定,WT染色体序列就未知,序列未知,无法设计引物来鉴定;4. KI,tm,em类的基因修饰小鼠模型可以确定基因组插入位置,WT染色体序列就已知,根据序列就可以设计引物区分修饰发生变化的同源重组后或缺失后或插入后的区别;5. 同窝对照往往是研究母鼠哺乳等行为才需要,多数时候需要的是同一批或鼠龄接近的小鼠,一般一个月鼠龄差异以内即可,请对照看一下;6.如果确实需要同窝对照,而又实在分不出C

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