选择模板

更多 最新动态

  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 31天前
    战友您好!会的,这也是条件性基因敲除小鼠通过繁育转化为全身基因敲除小鼠模型的常见策略之一:生殖细胞表达Cre小鼠繁育。是否纯合取决于您是将这样的小鼠自交还是与WT小鼠交配,自交存在这种可能性的。更多欢迎实名+单位添加我的微信18911466919周效华进一步交流,获取原始文献或PPT等资料。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 43天前
    1. 狭义上,转基因小鼠特指随机转基因小鼠,广义上,转基因小鼠泛指所有基因修饰小鼠;2. 首先确定手里的Cre工具小鼠到底是随机转基因(Tg)还是定点敲入小鼠(KI,tm),这与是否有特定启动子无关,与原始文献方法有关;3. Tg通过普通PCR的genotyping无法判定纯合子小鼠,杂合子小鼠,原因是位置不确定,WT染色体序列就未知,序列未知,无法设计引物来鉴定;4. KI,tm,em类的基因修饰小鼠模型可以确定基因组插入位置,WT染色体序列就已知,根据序列就可以设计引物区分修饰发生变化的同源重组后或缺失后或插入后的区别;5. 同窝对照往往是研究母鼠哺乳等行为才需要,多数时候需要的是同一批或鼠龄接近的小鼠,一般一个月鼠龄差异以内即可,请对照看一下;6.如果确实需要同窝对照,而又实在分不出C
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 模式百科 | 小鼠、斑马鱼…饲养繁育、定制、文献解读全在这里 65天前
    一篇四五万浏览量模式生物版块的帖子,讲的究竟是什么,欢迎关注下载PPT了解,内有一个彩蛋,发现的欢迎实名添加我的微信18911466919周效华发红包打赏哦,嘿嘿。http://dxy.me/BVnequ;条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略Mating Strategy forConditional Knock-Out (flox) Mouse
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 91天前
    去Neo繁育是指利用打靶载体初期设计在Neo基因两侧预埋的FRT(或loxP)位点,将第一代获得的嵌和雄鼠与表达Flp(或Cre)雌鼠交配,利用Flp-FRT(或Cre-loxP)系统的作用规律,切除Neo基因的过程,一般紧接着需要再与WT小鼠交配,筛选获得去Flp(或Cre)基因型的小鼠。两代繁育都是为了尽可能排除Neo基因或Flp(或Cre)基因对实验研究变量因素的干扰,具体在过去一些文献研究中也有少数忽略此因素所做的研究结果,需要自行判断是否有干扰。更多欢迎实名+单位添加我的微信18911466919周效华进一步交流,获取原始文献或PPT等资料咨询。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 91天前
    一般针对不同的组织或细胞类型,或分离细胞或IHC切片染色,通过观察特定细胞群里蛋白敲除后降低的多少或镜下统计来判断大致的敲除效率。建议一定要查阅原始Cre小鼠模型的文章或原始引用文献。更多欢迎实名+单位添加我的微信18911466919周效华进一步交流,获取原始文献或PPT等资料咨询。
  • 周效华
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 Atg7 fl/fl × Lyz2Cre+ →TNF tg mice这是什么小鼠 168天前
    Atg7 fl/fl小鼠是指在Atg7基因的位点的两条同源染色体上都插入了一对同向放置的loxP位点,Lyz2Cre+表示在Lyz2基因表达的细胞里,有Cre基因的表达;由于Cre蛋白是一种可以切割特定同向放置的两个loxP位点,并删除掉两个loxP位点之间序列的酶,所以可以达到只在Lyz2基因表达的细胞(一般是髓系来源的细胞,比如巨噬细胞)中,特异性敲除Atg7基因,来研究Atg7基因对自噬等过程中的作用。 TNF tg mice小鼠就是将TNF基因随机插入到小鼠基因组上,并筛选获得了一个可以表达TNF基因(插入不代表表达,有时会被沉没)的小鼠品系。更多欢迎实名添加我的微信13341167919周效华进一步交流,发你相关文献或讲座PPT。希望对你的研究设计,基金思路有帮助。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 求助大神:可否在 “敲除某种基因” 的小鼠身上种植 “沉默了某种基因 ”的肿瘤细胞? 188天前
    战友你好!你的问题涉及三步:1. 全身敲除A品系小鼠中的同源染色体上的两个B基因;2. 敲除C癌细胞系中的同源染色体上的两个D基因;3. 接种敲除了D基因的C细胞到敲除了B基因的E品系小鼠上。第一步A常见选择C57BL/6近交系遗传背景小鼠;第二步C常见选择人源遗传背景细胞系;第三步E常见选择Balb/c近交系遗传背景小鼠;第一步B、第二步D可以自由选择。看出关键问题了吗?有两个。A与E的遗传背景必须一致,但常见选择不一致;C与A或E种属来源必须一致,但常见选择不一致。只要有且仅有想办法让如上两点一致了,你的研究目的才有可能(不是一定)实现了。第一次从事这方面研究,如果没有每一步单独实验的经验,三种实验混到一起,不乱的都是天才,乱的才是常人,供参考。更多交流欢迎查阅我以往的答疑帖子或请实名+
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略 208天前
    谢谢战友关注!作为模式生物三年排名第一的答疑帖子,希望用我的亲身经历从深层次可以帮助到大家的学术科研。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】Cre/CreERT2和floxed小鼠繁育的科学由来(文末有系列学术讲座PPT兼答疑) 215天前
    佐夏叶 谢谢周老师的回复,我觉得strategyC 结果有问题,小鼠应该都是flox/folx。另外想请教一下,flox/flox和flox/+一个是纯合子一个是杂合子,在亲代功能上应该是一样的,只要有cre都会被剪接,只是会对子代的基因型有影响;还是纯合子的剪接能力更强一些。期待老师的解答,刚刚接触,有些问题不太懂。战友你好!Strategy C我写的都是flox/flox啊?问题是?杂合子与纯合子在被剪切的能力上没有差别,野生型无法被剪切。更多欢迎实名添加我的微信13341167919周效华或电话我进一步交流。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】Cre/CreERT2和floxed小鼠繁育的科学由来(文末有系列学术讲座PPT兼答疑) 217天前
    这两种基因型小鼠的不同点在于他们的Cre基因型。这里举例使用的Emx1-IRES-Cre小鼠是定点插入的小鼠,可以区分出纯合子与杂合子,不同就在于左侧的是纯合子,右侧的是杂合子。理论上,不管是纯合子,杂合子,只有有Cre基因的表达,对flox基因型上loxP位点的切割进而达到条件性细胞/组织特异性敲除的效果是一样的。
  • 周效华
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 【精华】Cre/CreERT2和floxed小鼠繁育的科学由来(文末有系列学术讲座PPT兼答疑) 221天前
    最新学术交流PPT预览(摘选): How Genome Editing technologies Empower the Genetically Modified Animal Model Research in Generation, Breading, Genotyping and Phenotyping-Xiaohua Zhou
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 在JAX Lab购买的基因敲除小鼠一些问题 237天前
    是的,文献原始资料才是精华之所在,如果您能有条件做一些预实验那就更加完美了。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 基因敲除 小鼠 哪家强? 251天前
    http://dxy.me/6fI32i receptor 1 (alpha) KO Homozygotes for targeted null mutations have reduced skeletal growth and are infertile. Females exhibit hypoplastic uteri and nonovulatory ovaries, while males produce few sperm of low motility and fertilizing capacity.此基因全身基因敲除纯合子小鼠模型是有问题的,几乎是不孕不育的,已经有文
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 在JAX Lab购买的基因敲除小鼠一些问题 251天前
    建议除了仔细读一下Jax官网的信息,相应的参考文献也需要一一下载阅读一下,Jax只是小鼠品系的保种者,信息的整理呈现者,更多原始信息还是都在文献里面的。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 在动物模型中,除了基因敲除,还有别的办法使某个基因不表达么? 251天前
    除了一些较为特异性的靶点抑制剂,主流方法主要有三大技术类型:1. 早年的随机转基因技术利用RNAi干扰原理,过表达相应的shRNA KD的原理;2. 十多年后出现的ES细胞打靶技术;3. 再过二十多年后出现的ZFN,TALEN,Crispr-Cas9等基因编辑技术。更多欢迎查阅我的学术讲座PPT帖子或实名介绍自己联系我进一步咨询。http://dxy.me/2YrURz 条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略Mating Strategy forConditional Kno
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 基因敲除鼠,细胞提取蛋白,westernblot 出现还基因的磷酸化条带,是什么原因呢 251天前
    主要参考看基因敲除小鼠模型设计及抗体信息,这不是我们接收到的第一例类似情况的咨询了,从细胞到小鼠,我们都观察到了这一类特殊情况,虽然概率不高,但代表了一类基因敲除类型的普遍情况,更多欢迎查阅我的帖子,或实名联系我进一步咨询。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 利用crispr cas9 进行细胞基因敲除 251天前
    http://dxy.me/Eruaey基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol 供参考,更多欢迎实名联系我进一步沟通。
  • 周效华
    周效华  回复了帖子 基因敲除小鼠 问题请教 251天前
    f,F,fl,flox等都是flanked(从两侧攻击) by two loxP site的英文专有缩写,作为动词科表述为floxed mice,作为名字可以表述为flox mice,f/+表示flox的杂合子,f/f表示flox的纯合子,注意flox只是插入了一对(从两侧攻击方向)的loxP位点,不是敲除,中文常引申译为条件性敲出小鼠,名称虽然带有敲除二字,其实是正常的小鼠。与-/-的含义完全不同,-/-表示完全敲除,在这个文献里,由于分离的是f/f小鼠MEF,腺病毒(Ad-Cre)的表达会让两条同源染色体都被切割达到敲除,故而用-/-表述。更多欢迎您查阅我的学术讲座专业答疑帖或联系我进一步咨询——http://dxy.me/UJRRBr

关于我们|联系我们|版权声明|资格证书|丁香志|加盟丁香园|友情链接 丁香园旗下网站: 丁香园|丁香通| 人才|会议|药学|博客

Language Copyright © 2000-2018 DXY All Rights Reserved.
网站备案号:浙B2-20070219