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  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  发布了新帖 教你发表外泌体高分文章的套路 327天前

    临床医生朋友们,是否还苦于写课题写文章没有好思路?今天我们解析一篇2016年发表在顶级杂志Cancer cell(IF=23.216分)上的文章,用我们经典的ABCD四要素模式来分析一下。同时教给大家如何发表与目前研究大热—外泌体相关的文章。直入主题,我们先解读一下题目:Exosome-Transmitted lncARSR Promotes SunitinibResistance in Renal Cancer by Acting as aCompeting Endogenous RNA又是A基因通过B基因/信号通路在C疾病中发挥D功能,今天就是要教你用这招4要素。这是一篇经典的研究外泌体在肿瘤中发挥功能的文章,且听Ds.S娓娓道来。A基因、C疾病的由来:C疾病:本文章的研究肿瘤为前肾癌,

  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  的帖子被加了2分 328天前

    三步搞定外泌体实验

    近几年,外泌体以迅雷不及掩耳之势火了起来。外泌体相关研究逐渐从小众走向大众,受到越来越多的关注,涌现了一大批的外泌体课题。但大家还是感觉外泌体研究 好 难 啊!为什么呢?首要原因就在于该领域里还木有统一的、简单可行且纯度很高的分离方法。每一个外泌体研究者都注定要为外泌体...
  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  回复了帖子 三步搞定外泌体实验 335天前
  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  发布了新帖 三步搞定外泌体实验 356天前

    近几年,外泌体以迅雷不及掩耳之势火了起来。外泌体相关研究逐渐从小众走向大众,受到越来越多的关注,涌现了一大批的外泌体课题。但大家还是感觉外泌体研究 好 难 啊!为什么呢?首要原因就在于该领域里还木有统一的、简单可行且纯度很高的分离方法。每一个外泌体研究者都注定要为外泌体的分离纯化与鉴定而烦恼。今天小编就来给大家聊一聊,如何搞定外泌体研究中的第一步。分离:超速离心法:超速离心法是外泌体分离最常见的技术之一。据不完全统计,约有1/2的研究者会选择该种方式分离外泌体。该方法由几个离心步骤组成,可分步去除细胞、细胞碎片和大囊泡,沉淀外泌体(如图所示)。但该种方法用于血浆和血清等粘性生物液体时效率较低,且重复离心操作有可能对外泌体造成损害,从而降低其质量。如将超速离心配合蔗糖溶液进行梯度密度

  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  发布了新帖 浅析克隆形成那些事 369天前

    首先,一句话概括克隆形成,克隆形成实验就是单个细胞形成50个细胞数以上克隆的能力。其次,附上我的结果图。最后,以实验过程为切入点,分析一下克隆形成的关键点。第一点:细胞的准备细胞感染后的状态决定实验结果的客观性,排除基因对细胞的影响,如果细胞感染后就没有增殖或状态不佳,那么做出的结果也是不客观的。第二点:细胞悬液的制备1. 小编着重想说的是一定要充分吹打细胞悬液,尤其是像HCT116这种比较容易结团的细胞,如果铺下去细胞是结团的那么实验就没有必要继续下去了。2. 接种时要根据密度梯度稀释,每次稀释倍数最好不要超过25倍,否则会导致误差的产生。3. 稀释成1w个细胞每毫升后,可以吸取100ul到96孔板中,既可以对比实验组和对照组之间是否有差异,又能观察到细胞密度是不是准确的,对于高手而言,9

  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  回复了帖子 如何做好细胞克隆形成 387天前
    不好意思,刚刚看到,对于您的提的两个问题有如下解答:1、统计的是染色上的克隆团,对于不同细胞克隆大小不一样,可以统一标准,如果太小的克隆不算在内的话,那就所有的孔都按此标准计数即可。对于克隆大小超过50个,这个是为了便于克隆板可以进行固定染色的时间的参考,在统计时只要统一标准就可以;2、统计时是人工一个个计数的,为防止数重,可以用mark笔做标记,这样避免重复或漏数。对于有时有2个克隆连在一起的情况,如果是肉眼可见的2团,就可以分开统计,统一标准就没有问题。由于做克隆形成实验时是有复孔的,所以孔的数目略有误差不影响实验结果。更多实验咨询,欢迎关注吉凯基因公众号!
  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  回复了帖子 【求助】MTT高手请进 388天前
    可以看一下我刚发的一个文哈
  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  回复了帖子 【求助】看文献时看不懂的两幅图,求大神们帮助 388天前
    欢迎使用吉凯生信云平台
  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  发布了新帖 细胞增殖实验常用方法——MTT(吉凯基因) 389天前

    1、实验材料1)主要试剂MTT、DMSO、完全培养基、胰酶、PBS;2) 主要器材96孔板、血球计数板、酶标仪。2、实验步骤1)将处于对数生长期的各实验组细胞胰酶消化后,完全培养基重悬成细胞悬液,并计数。2)根据细胞生长快慢决定铺板细胞密度[终点检测时细胞密度低于100%] (多数为2000 cell/well),每组3-5重复,根据实验设计决定铺板数量(如检测5天,则铺5张96孔板)。3)统一铺好后,待细胞完全沉淀下来后,在显微镜下观察各实验组的细胞密度[如果密度不均匀,则固定一组,微调其他组细胞的量再次铺板,如:发现Con组细胞较多,降低细胞量再次铺板] ,放入细胞培养箱中培养。4)从铺板后第二天开始,培养终止前4 h[每天的检测时间点要一致] 加入20 μ

  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  发布了新帖 细胞增殖实验常用实验方法总结(吉凯基因) 389天前

    一、       实验目的通过检测处于增值状态的细胞数量来检验目的基因与细胞增殖的关联。二、      实验原理:1、DNA合成检测:1)Brdu:溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine, BrdU)是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物,可竞争性掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶,利用抗体连接酶或荧光素作为指示系统标记Brdu,当处于旺盛分裂的细胞掺入Brdu后,即可检测出含有Brdu的细胞,并以此判断细胞的数目。固相包被细胞的微孔中加入BrdU抗体,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样

  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  发布了新帖 如何做好血管形成实验 416天前

    一、实验目的    通过研究肿瘤细胞上清液诱导HMEC-1细胞形成管腔的能力,从而分析该细胞成瘤以及转移能力。二、实验原理肿瘤血管生成是一个极其复杂的过程,一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1-2 mm,都会有血管生成,这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用,抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。吉凯体外血管生成实验中,收集不同实验组别肿瘤细胞无血清上清液,刺激人脐静脉内皮细胞HMEC-1在Matrigel上形成管腔,通过CQ1仪器扫板分析比较各组别肿瘤细胞上清分泌物对血管

  • 吉凯基因技术员
  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  发布了新帖 如何做好细胞克隆形成 416天前

    (一)     实验目的通过细胞在细胞培养板上的克隆形成能力来提示细胞的增殖能力。(二)     实验原理克隆形成是测定细胞增殖能力的有效方法之一。单个细胞在体外持续6代以上,其后代所组成的细胞群称为克隆。这时每个克隆含有50个以上的细胞,大小在0.3-1.0 mm之间,通过计数克隆形成率,可对单个细胞的增殖潜力做定量分析,了解细胞的增殖能力和独立生存能力。(三)     实验流程(四)     实验材料生物安全柜、荧光显微镜、离心机、倒置显微镜、CO2培养箱;完全培养基、胰酶、PBS、结晶紫、4%多聚甲醛(五)  

  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  发布了新帖 细胞划痕全流程怎么做? 423天前

    如题:细胞划痕的全流程如何做?看网上很多人划痕做的挺好的,但是自己划的旧不行,求大神指点!

  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  发布了新帖 静息电位 1490天前

    为什么实测静息电位负值总是略低于钾离子平衡浓度

  • 吉凯基因技术员
    吉凯基因技术员  发布了新帖 细胞感染为什么加嘌呤霉素 1492天前

    嘌呤霉素可以导致蛋白质合成的终止,在细胞感染过程中嘌呤霉素也作为了一个感染条件,请问这是为什么? 嘌呤霉素在其它细胞技术方面是否还有其它作用? 新人谢过各位

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