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  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 哭了,蛋白电泳内参一直不齐(附图) 73天前
    嗯嗯,你的意思是所有不上样的孔都用loading补齐么?我10样本用15孔梳,除了marker以外,紧邻样本也有时用loading补齐~不过效果好像也不尽如人意
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 哭了,蛋白电泳内参一直不齐(附图) 73天前
    谢谢哈,你的意思是指每孔加样不同么?我已经保证每孔相同体积浓度上样量了啊,另外抗体稀释液浸泡的意思是4度泡过夜不用摇床摇么?麻烦你了
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 哭了,蛋白电泳内参一直不齐(附图) 73天前
    您好谢谢哈,我不太懂,你的意思是每个孔上样量相同的意思么?我已经BCA测蛋白浓度,保证每孔上样量浓度总体积一直了
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 哭了,蛋白电泳内参一直不齐(附图) 73天前
    因为样本已经有10个组,所以之前都用15孔,最近实验条件变了减少了几个,我下次试试10孔的!也谢谢哈
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 哭了,蛋白电泳内参一直不齐(附图) 73天前
    我也觉得是转膜和制胶的问题,也摸索挺久了还是找不到合适的,最近打算试试自制梯度胶了,因为要一张膜出来胶原1(138kda),胶原3(130), actin(45),p-SMAD3(53),SMAD3(53)这5个蛋白,所以单一浓度估计就是考染那种有些上去了有些还没上去。另外总觉得条带不好可能是自己做的胶浓度不均匀也有关系,怎么能尽量均匀呢?现在这次用的bio-rad预制转膜液和膜半干快速转预设3min,感觉actin挺好但是138的大分子就不行,下次尝试下延长1分钟。
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 哭了,蛋白电泳内参一直不齐(附图) 73天前
    抱歉啊回复晚了!谢谢哈!1.电泳槽是要求一点都不漏才能行是么,总觉得两块玻璃板夹着漏液肯定有,就是多少的问题,所以在跑胶时我总是反复拆开重新组装,试着尽量夹紧减少漏液 2.胶在电泳完的确有时会有些变形,所以也会影响条带的深浅么?我明白了以后转膜时尽量把胶放回最初形态,海绵是全新的只用一次应该是平整的吧,转膜仪有些用久的污渍黏在上面试过怎么都清除不掉,这该怎么办呢 3.最近摸索出来一抗平稳流动的方式了,总觉得还是转膜和跑胶出的问题可能性大些。/img1.dxycdn.com/2018/1104/128/3309896139172112101-16w.jpg!w640,这是最近一次,左上是胶原1,左下是actin,这俩都挺好~右侧是新试的SMAD3抗体,别人成功过不过我做的不好。4 我都是一个盒
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 哭了,蛋白电泳内参一直不齐(附图) 73天前
    抱歉回复晚了呢,请问下您能看到样品的什么变化趋势和规律呢?我还没看出来。另外请问制胶工艺的改进是?总觉得自己手工制胶在所难免会出现不均匀的地方,谢谢啦
  • 加油小熊猫
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 全国首例「医告官」案,二审开庭的日子定了! 85天前
    除了园子里大家互相感慨,我们能做些什么实在的呢?希望楼主告诉我们,谢谢!
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 现在医疗行业的夕阳科室 zt 132天前
    以前一直以为大血管也就北上广加武汉华西湘雅做的好,现在一般的省心外就很好了么?另外夹层病人感觉数量不够啊,一直都不能当主流吧
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 (帮转)现在医疗行业的夕阳科室 135天前
    哎师兄真是不容易,那还打算干心外么?胸外血管外其实也可以考虑下~另外心外海龟博士也这么难找工作啊
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  发布了新帖 (转自烧伤超人阿宝)几句不多余的话 136天前

    阿宝受够了委屈也凉透了心,可能是他最后一次站出来了,惋惜。(转)今天,公众号功能终于恢复,时隔一月再次登上熟悉的界面,百感交集。最近,很多朋友通过各种途径和我联系,问我各种问题。最近身心俱疲,一直闭门谢客,思过养伤,往事不想再提。然而树欲静而风不止,想了想,为了避免种种误会,还是自己把话说清楚,一次性做个了结吧。向参与本案的**表示敬意。在这次事件的处理中,警方一直坚持依法依规,做到了公平公正,个人合法权益也得到了完全的保证和维护。警方严格执法,依法执法,是我们一直呼吁的事情。既然我们一直在呼吁,我们就不能学叶公好龙,当警方执法执到自己头上,就不肯接受。我们不能仅仅在认同某法律条款的时候才遵守法律,不能仅仅在法律对自己有利的时候才尊重法律,也不能仅仅在执法对自己有利的时候才尊重执法**。本人

  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  发布了新帖 (帮转)现在医疗行业的夕阳科室 136天前

    我有朋友在感染科,读研时也是挺郁闷,觉得自己没啥前途哎,下面是转发的(转)小弟在实习时知道,烧伤科老师自己都说这是夕阳科室,所以读研时也没考虑选它…今天和一师兄聊起,才发现我从事的心外科也是了,基本所有领域被心内科抢走了,搭桥支架之争就不多说,现在心内科瓣膜手术的主动脉瓣置换有TAVI,二尖瓣有球囊扩张mitral clips等等,大血管手术在血管外科支架的强力攻势下AB型夹层也逐渐被蚕食…比如心外科最多的二尖瓣狭窄后换瓣,主要是因为70-80年代穷所以很多人得风湿热,20年后开始瓣膜逐渐毁损才有现在这么多手术做,然后国人现在有钱了,这种人慢慢会越来越少…随着孕期检查的完善和提高,需要外科治疗的先心病越来越少哎,请问大家有什么见解或者吐槽么?自己的科室也行,你了解别人的也好,欢迎讨论,也能给

  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 从两千到两万:执医考前打气,用切身经历告诉你有证的重要性 144天前
    我想问下你们主诊是什么概念,我们医院主诊是主任级别的
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 阿宝的72小时和三进派出所 161天前
    更新下信息啊大夫,陈竺早都退了好多年了
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 阿宝的72小时和三进派出所 161天前
    引爆疫苗问题的那篇微信文章"疫苗之王",不也在一天之后就被删了么,先瞒,瞒不住了再说别的,一贯做法
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 卫生健康委、国家药监局联合印发接种长春长生公司狂犬病疫苗续种补种方案 161天前
    对于百白破补种有意义这容易理解,但如果是扎扎实实见血了的狗咬伤,却打了假狂犬病疫苗,现在的补种有意义么?请教下大家
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 (转自理想记)那天,阿宝遭遇了什么? 161天前
    别咒他啊,怎么就一路走好了?
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 (转自理想记)阿宝的72小时和三进派出所 161天前
    是啊投胎已经选择了hard模式,这个年代当医生真是直接炼狱难度了
  • 加油小熊猫
    加油小熊猫  回复了帖子 (转自理想记)那天,阿宝遭遇了什么? 161天前
    天涯虎扑各个平台都可以扩散下,其实这就是帮阿宝了吧

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