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  • 丁小香DD
    丁小香DD  发布了新帖 western blot 330天前

    马克 转自别人一、条带中所遇到的情况1. 完全没有条带完全没有条带的原因主要有以下4点:(1) 抗体加错(最常见一抗加错抗体,或二抗种属加错)。(2) 转膜出现了问题(常见膜放反)。(3) 发光液失效或不够灵敏。(4) 蛋白上样量过少,一抗浓度太低。2. 目的条带有但高背景高背景可能是WB中最常见出现的问题,目的条带单一清晰,但是其他地方又弥漫性较为均一的背景,主要原因:(1) 洗膜时间和次数不够(常用10min*3)。(2) 封闭不够好。(3) 一抗浓度过高,可通过调整一抗浓度来降低背景。3.出现非均一性背景原因:膜可能曾经干过,在封闭的时候,洗一抗,洗二抗,以及发光的时候都时刻需要注意蛋白面不要风干,风干之后结果很可能

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