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  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 寻找病毒保存液 12天前
    可以加20%甘油保存;还有一部分实验者是直接冻存,我们用的BioG病毒保存液可以各种RNA病毒和DNA病毒样本的保存,具体样本包括咽拭子、鼻拭子、生殖道拭子、唾液等。
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 求助:有谁知道病毒样颗粒和假病毒的定义和区别? 12天前
    假病毒与慢病毒不同,假病毒由MS2噬菌体外壳蛋白包裹外源核酸片段是一种逆转录病毒,为单链RNA,之前有让BIODAI给我们实验室做过假病毒服务,如图:
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 做RT-PCR需要哪些试剂 14天前
    2xBIOGHSC Super MultiProbe  Mix   10μl   BIOGHSC Super Enzyme Mix         0.5μl     RT-PCR Enhancer                0.25ul   上下游引物 (10μM)             各0.6μlTaqMan Probe (10μM)             0.5μl 模板RNA                      10ng-1μg RNase free ddH2O                加至20µl
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 磁珠法抽提核酸的配方 16天前
    离心柱的方法的提取纯度高一些适合实验室少量样品快速处理,但是BAIDAI单次处理的样本最多能达到1ml,而磁珠法只能处理0.1-0.5ml血液,一般采用自动化核酸工作站提取,适合大量样品快速处理。
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 很郁闷的taqman荧光定量pcr结果 46天前
    楼主你这个原因可能是污染。探针法特异性较强,得到的结果更加准确,费用会比较贵如果是引物二聚体,那么适当调低引物的加量,如果始终有引物二聚体峰,而且认为有影响的话,那么只能更换引物。如果是污染,那么要注意以下方面的操作。模板添加区和混合液配制区最好分开。我们在做BIODAI-PCR时,在混合液配制区直接把阴性的管子盖给盖上,然后将分装好的各个管子拿到模板添加区,按照低浓度到高浓度的顺序添加。加模板时,每次都换KIT。
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 反转录试剂盒的选择 69天前
    逆转录是生物的自然发生的过程,反转录是人工进行的过程。简单地说,反转录是人工行为,是体外实验。逆转录是RNA类病毒形成自己的DNA并整合到宿主细胞的DNA上,以RNA为模板形成DNA的过程,我们以Hela 细胞总RNA为模板,以Oligo(dT)18为引物,使用BIOG 逆转录酶,取1/10cDNA产物进行PCR扩增(β-actin)实验
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 实验经验tips——血清血浆之miRNA 75天前
    microRNA是非编码的小的RNA,长度通常约20至30碱基对。microRNA特别是几十bp的不太好提取,用过Qiagen、BIOG效果还可以,但是得率都不是太高,后续pcr的CT值基本上都在30左右,不知道是否是量少的原因导致的。
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 血清DNA提取纯度太低,哪位高手给指导下 96天前
    楼主你提取到的DNA得率如何?如果得率也不高的时候,建议增加消化时间;如果DNA的得率OK,可以增加洗涤的次数。再没解决问题就只能换其他盒子了。听我师姐说他们用BIOG离心法提取样本血液中的DNA,然后用Qubit 测DNA的浓度,我认为楼主如果觉得提取到的DNA浓度不高也可以用3倍体积的无水乙醇、0.1体积的NaAC和1ul 15mg/ml的glycogen沉淀进行浓缩。
  • 一片华树林
    一片华树林  : 可能存在引物二聚体或非特异性扩增,也有可能引物设计有问题,我们实验室打算将提取小鼠血样中的DNA做后续的BIODAI SYBR Green 荧光定量PCR检测目标DNA,一般引物设计时特异性没有问题,只是理论,关键要看实践。普通PCR的反应液、扩增程序、PCR仪器跟荧光定量PCR都不一样。
    • huiyt  : 荧光定量PCR对照组出现与实验组相同的溶解曲线 http://dxy.me/JFNZ7b 我最近做荧光定量是出现的结果比较奇怪,具体情况如下,请各位帮忙分析一下是什么原因: 第一次试验:3个实验组,1个对照组;结果显示实验组的不同模版梯度与CT值是对应的,在20个循环左右起峰。对...
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 (求助)如何提高质粒的转染效率 108天前
    很多质粒转染的初学者通常都不会在乎甚至愿意多加点DNA,但是要注意的是,DNA量过少固然转染效率不高,DNA量过多同样会降低转染效率。所以预实验需要按照说明书的要求,按一定比例混合适量的质粒DNA和转染试剂。有的转染试剂要求DNA的量多些,有的转染试剂效率高只要很少DNA。我们的实验室用的RFect建议用24孔板做,每孔1ug质粒,设置biadai 2ul,3ul,4ul三个梯度,每个梯度做2个复孔,DNA 和转染试剂的比例,是1:2
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 如何选择反转录PCR的内参,求教 124天前
    这是我手头有的部分资料,希望可以帮到楼主,供楼主参考
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 PCR实验室该如何设计(上) 126天前
    PCR(聚合酶链式反应)技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤,荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为BIOGHC荧光探针和BIOGHSC荧光染料,PCR的应用:核酸定量分析。 对传染性疾病进行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的检测 , 比如近期流行的甲型H1N1流感, 转基因动植物基因拷贝数的检测,RNAi 基因失活率的检测等; 基因表达差异分析。 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 ( 如药物处理、物理处理、化学处理等 ) ,特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证。
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 常规PCR mix 可以用于多重PCR 扩增吗? 129天前
    我们用的PCR盒子里有ddH2O,2×BIOGHSC  Super MultiProbe  Master mix,Taq酶保护液,我觉得常规的PCR mix对多重PCR扩增不适用。
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 细胞转染注意事项 130天前
    首先需要细胞的培养,然后设计目标siRNA再合成,细胞的转染是整个实验的关键,一般我们实验室在做完RFECT,SIRNA转染后都会在6h小时先观察荧光情况,最后转染后48h收细胞做qPCR基因水平检测,也有很多实验室转染后72h收细胞提蛋白做western Blotting蛋白水平检测。 
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 石蜡组织提取DNA容易降解 152天前
    苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .但缺点是费时费力,苯酚和氯仿还有一定毒性,我见过的实验室很少有用这种方法的。试剂盒经典的是离心柱(BIODAI)就是把硅胶膜固定在离心管中,类似于超滤膜,用离心力或者负压让液体通过硅胶膜,核酸就留在膜上。在经过洗涤、洗脱的步骤得到核酸。这种方法的优点是操作简单、时间短,现在也能达到很高的质量
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 我需要买血液microRNA提取试剂盒 157天前
    游离RNA是非编码的小的RNA,其长度通常约20至30碱基对。microRNA特别是几十bp的不太好提取,用过Qiagen、BIOG效果还可以,但是得率都不是太高,后续pcr的CT值基本上都在30左右。
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 Ä爱纯派 | 怎样做好病毒颗粒浓缩? 159天前
    听我师姐说他们用BIOG离心技术提取样本血清中的DNA,然后用Qubit 测DNA的浓度,我认为楼主如果觉得提取到的DNA浓度不高可以用3倍体积的无水乙醇、0.1体积的NaAC和1ul 15mg/ml的glycogen沉淀进行浓缩,或者可以用真空浓缩仪进行浓缩
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 关于病毒浓缩 159天前
    PEG沉淀用的最多了,但是我个人觉得没有BIODAI便捷,PEG-8000浓缩法:1. 5X PEG8000+NaCl配制 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中;121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min;保存在4℃。2. 滤头过滤慢病毒上清液;3. 每30ml过滤后的病毒初始液,加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml;4. 每20~30min混合一次,共进行3-5次;5. 4度放置过夜;6. 4度,4000 g,离心 20min;7. 吸弃上清,静置管子1~2分钟,吸走残余液体;8. 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀;9. 集中后的病毒悬液分装成50 μl每份,保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃
  • 一片华树林
    一片华树林  的帖子被加了1分 192天前

    回复:【求助】请教怎样从凝血块中提取DNA,多谢各位。

    我们采用的BIODAI离心法要求取1.5ml离心管,可以直接将凝血块剪成5x5x5mm大小放入1.5ml离心管中,反复敲打挤压至1x1x1mm大小,再加入1ml结合液,轻弹管壁,室温放置5分钟,5,000 rpm 离心 3分钟,可在40分钟内获得基因组DNA
  • 一片华树林
    一片华树林  回复了帖子 请教怎样从凝血块中提取DNA,多谢各位。 193天前
    我们采用的BIODAI离心法要求取1.5ml离心管,可以直接将凝血块剪成5x5x5mm大小放入1.5ml离心管中,反复敲打挤压至1x1x1mm大小,再加入1ml结合液,轻弹管壁,室温放置5分钟,5,000 rpm 离心 3分钟,可在40分钟内获得基因组DNA

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