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  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  发布了新帖 细胞分选:流式与磁珠你选哪个? 10天前

    流式细胞仪分选原理当经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中,被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液,在鞘液的包裹和推动下,细胞被排成单列,以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体,充电后振动,使喷出的液流断裂为均匀的液滴,待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正、负不同的电荷,当液滴流经过带有几千伏的偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,没有充电的液滴落入中间的废液容器,从而实现细胞的分离。操作流程1.先制备单细胞悬液(可检测多种样本的单细胞悬液:外周血、骨髓、细胞穿刺液、洗脱液、实体组织、培养细胞等,如果是无菌实验应该注意无菌操作)2.样本染色:调节电压与选取目的细胞群(分选前应该做一个预实验,优化仪器的测定条件,建立分选门)3.细胞分选

  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  发布了新帖 简单又不简单---CCK8与MTT 10天前

    是什么CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8,也就是进行细胞计数的一个盒子。那它的用途也就大致可以猜到,和细胞增殖、细胞毒性相关的实验都可以。CCK8的原理在CCK-8试剂盒中,最主要的化学药品是WST-8,化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。它的核心基团和MTT是一样的,是MTT的升级版本。在电子耦合试剂(也就是细胞是活的,有呼吸,有能量代谢)存在的情况下,可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。活细胞越多,产生的Formazan就越多,颜色也会越深。     所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢,

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  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  发布了新帖 如何设计国自然热点circRNA研究路线 10天前

    1)国自然热点    国自然课题热点中 circRNA、LincRNA、circRNA、ceRNA项目呈逐年增长趋势(2)了解circRNA的研究技术路线前期实验设计思路:先讲miRNA→再讲mRNA→最后circRNA→细胞模型+大鼠模型→IVDDStep1:选择细胞模型和动物模型发现临床问题后,确定细胞和动物模型,在细胞、动物模型中来建立临床问题和科学假说的直接联系。    可以取组织或者器官最丰富或者最重要的细胞系或者原代细胞,进行传代培养Step 2:先从哪个分子着手呢?miRNA!先从miRNA入手吧,上可找circ,下可寻mRNA。呵呵,没钱测序?GEO里有啊那接下来就是一顿围绕miRNA的操作了:Q

  • 一条欢脱的DNA
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 ORF区太长,引物设计 48天前
    3500bp不算很长,8000-10000bp都有扩增过,你的模板是什么?扩增条件是什么?或者考虑换个酶吧。
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 求助 关于引物合成公司 48天前
    铂尚,生工,擎科
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 双荧光素酶、EMSA、RIP、CHIP、MSP、RNA-Pulldown实验解惑 55天前
    需要完整ppt的可私信
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 双荧光素酶、EMSA、RIP、CHIP、MSP、RNA-Pulldown实验解惑 55天前
    需要完整ppt的可私信
  • 一条欢脱的DNA
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 我想升2级…… 68天前
    求回关
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 新人来报道请大家帮帮忙 68天前
    已关注,求回关
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  发布了新帖 文献分享:TET1调控背角神经元BDNF的表达从而介导病理性神经痛 68天前

    脊髓神经结扎(SNL)不仅促进Tet1依赖的去甲基化,使bdnf启动子上的5mc转化为5hmc,还负性调控了DNMTs,从而抑制bdnf启动子的甲基化(5mc)。这两种机制都增强了背角神经元中bdnf的转录,从而为神经性异位疼痛的发生奠定了基础。Tet(ten-eleven translocation)蛋白:Tet蛋白可以催化5-甲基胞嘧啶(5-mC)转化为5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC),是DNA去甲基化过程中的一种重要的酶。DNMTs:是甲基化调控因子。bdnf:即脑源性神经营养因子,是在脑内合成的一种蛋白质,它广泛分布于中枢神经系统内,在中枢神经系统发育过程中,对神经元的存活、分化、生长发育起重要作用。 Result1:SNL增强了Tet1在同侧背角神经元(IPSI)中的表达,

  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  发布了新帖 TET1调控背角神经元BDNF的表达从而介导病理性神经痛 68天前

    脊髓神经结扎(SNL)不仅促进Tet1依赖的去甲基化,使bdnf启动子上的5mc转化为5hmc,还负性调控了DNMTs,从而抑制bdnf启动子的甲基化(5mc)。这两种机制都增强了背角神经元中bdnf的转录,从而为神经性异位疼痛的发生奠定了基础。Tet(ten-eleven translocation)蛋白:Tet蛋白可以催化5-甲基胞嘧啶(5-mC)转化为5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC),是DNA去甲基化过程中的一种重要的酶。DNMTs:是甲基化调控因子。bdnf:即脑源性神经营养因子,是在脑内合成的一种蛋白质,它广泛分布于中枢神经系统内,在中枢神经系统发育过程中,对神经元的存活、分化、生长发育起重要作用。 Result1:SNL增强了Tet1在同侧背角神经元(IPSI)中的表达,

  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  加入了调查派 80天前
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 冻存全血RNA提取 81天前
    先加RNA酶抑制剂,然后在冰上提取,尽量快点操作。这个真的没什么很好的办法。在这挂个公司,武汉勤致杰生物,根本提不出来,全降解了,付钱之前骗人说多好用,售后的时候态度超级差,毁我样本,不然也不至于挂他。
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 RNA抽提细节系列 (陆续补充中……) 81天前
    血与泪的教训给大家排雷
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 RNA抽提细节系列 (陆续补充中……) 81天前
    挂个公司,武汉勤致杰公司,试剂盒难用,一收完钱,售后态度特别差
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 普通PCR未出现目的条带问题 82天前
    目的条带大小是多少,实验条件,用的什么酶?单纯看图片是无法判断问题所在的
  • 一条欢脱的DNA
    一条欢脱的DNA  回复了帖子 如何设计国自然热点circRNA研究路线 82天前
    有相关的问题可以相互讨论学习

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