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  • 一僧画画
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    一僧画画  回复了帖子 T细胞体外激活检测 56天前
    您好,请问你找到刺激的方法了吗
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    一僧画画  回复了帖子 求助CFSE测小鼠脾淋巴细胞增殖实验 59天前
    您好,请问您有没有继续做出来呢,我现在也在做这个实验,也是一直做不出来多峰图,想请教一下!
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    一僧画画  悬赏2丁当求助 65天前

    cfse实验问题求教!

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    一僧画画  回复了帖子 CD3/28功能性抗体刺激脾组织淋巴细胞三天ELISA检测上清中IFNg水平极低 99天前
    请问你的问题解决了吗,我也是提取的小鼠脾脏细胞悬液,我是用PMA刺激的,做ELISA ,我是测的 TNF-alpha以及FASL,浓度也很低,几乎没有
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    一僧画画  回复了帖子 PMA离子霉素做细胞因子刺激和T细胞增殖浓度? 99天前
    请问你用这个试剂袭击过细胞后,细胞因子有明显分泌增加吗?我最近用ebioscience这个cell activation cocktail刺激的小鼠PMBC以及分选出的CD8+T细胞,之后用elisa测培养液里的TNF-alpha以及FASL,浓度很低很低,几乎为零,现在在考虑是这个刺激的试剂不适用,还是我的方法不对?请求指教,不胜感激!
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    一僧画画  回复了帖子 CFSE标记的小鼠脾脏T细胞增殖实验-已成功, 感谢大家!!:) 99天前
    也就是如果增殖的话,在显微镜下会看到明显的成团?
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    一僧画画  回复了帖子 Stemcell的Easysep磁珠法从骨髓中分选细胞靠谱吗 197天前
    你后来用这个试剂盒分选了吗,效果怎么样?我最近也要分选CD4/CD8等细胞了
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    一僧画画  回复了帖子 NOD小鼠骨髓来源的MSC 253天前
    想请教一下您是提的小鼠原代间充质干细胞吗?怎么长这么快啊,是用什么方法养的啊,我每次提原代最少要7天左右才能达到70%-80%
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    一僧画画  加入了调查派 256天前
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    一僧画画  回复了帖子 小鼠骨髓间充质干细胞的培养 264天前
    24楼 以上2张都是小鼠的。 第一张是我用全骨髓法原代培养48小时时的情况,这盘密度太高了。 不过我用的时Stemcell公司的培养液,12小时就大量贴壁,低密度接种(按产品说明书上来,差不多)克隆形成不错,增殖比普通培养液快多了,主要是里面含有一些刺激因子; 而作为对照,同样的密度,我用DMEM+15%FBS(Hyclone)的那盘48小时仅见少量细胞贴壁,而且细胞缓慢分裂,21天才能满一盘,传代后就不增殖了。 所以,我对一些战友说小鼠的细胞用普通培养液能养得很好表示羡慕,本人实在是在普通条件下无法达到这样得水平,只能达到原代细胞形成若干个克隆,可长得慢得很。 我个人体会,小鼠得MSC不是那么好养的,我做大鼠和猪得MSC,长得跟草似得,可是小鼠得就不一样了,大家如果能不用小鼠,还是不要用得
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    一僧画画  回复了帖子 小鼠骨髓间充质干细胞的培养 264天前
    +2 积分 18楼 小鼠的MSC不好养,我养了半年了,虽然细胞都活了,但是基本成纤维样的细胞很少,发现小鼠的MSC和大鼠和兔子的都不一样,完全不能用养大鼠的MSC的经验来套小鼠的。再仔细查阅文献,证实了我的想法。小鼠的骨髓细胞和人、大鼠、兔的骨髓细胞都不一样,他的成分更复杂,而且以网状内皮细胞、单核巨噬细胞为主,成纤维样的间充质细胞非常少,所以无论用淋巴细胞分离液还是全血差异贴壁法都很难得到纯化的MSC,细胞形态也不典型,多边形的细胞多,成纤维样的少。还有很多胞核透亮胞体多角形的细胞形成的集落,成簇分布,贴壁牢固,胰酶消化时候这些细胞很难消化下来(即使胞体完全收缩变圆也贴的很牢)。还有许多细胞伸展的很开(镜下显得细胞很淡),细胞核很大,有多个核。我用的α-MEM+20%血清,原代接种后48小
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    一僧画画  回复了帖子 小鼠骨髓间充质干细胞传代后形态改变了吗?? 265天前
    你好,我最近也在摸索着养这个细胞,感觉传代后呢个形态是变了的。你养的小鼠间充质干细胞有没有做过流式鉴定呢?这个是我最近养的,感觉给你养的形态上差不多,今天用P4做了流式鉴定, cd29  是84%,Sca-1 是29.9%,希望能和你交流一下,加个微信号吧 :wurannanana
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    一僧画画  回复了帖子 RT-PCR,QRT-PCR,real-timePCR之间什么区别? 269天前
    PCR:一种快速的DNA复制方法,由变性--退火(复性)--延伸三个基本反应步骤构成。RT-PCR:反转录PCR(reverse transcription-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA(cDNA),再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。real-time PCR:实时PCR(real-time PCR)属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。Real-timePCR与reverse transcription PCR相结合,能用微量的RNA来找出特定时间细胞组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT PCR的组合又被称之为定量RT-PCR(QRT-PCR)。 &n
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    一僧画画  回复了帖子 成纤维细胞与骨髓间充质干细胞的区别 273天前
    实际上养小鼠的msc会发现,即使是骨片法之类的没有fibroblast污染的,传代之后一样会变得很糟糕,可能原代里面长得极度标准的群落,传代之后在两代之间一样会长得亲妈都认不出来我个人的看法是,MSC和fibroblast都是中胚层的细胞,而且也都是所谓的‘成纤维样细胞’,实际上是基本上同一种细胞,无非是能不能长期在体外存活罢了(有兴趣的冷泉港等标准教材里面有教导成纤维细胞的永生化教程如果有耐心的,养多几代,到了p4~p5代又会出现标准群落,而p0~p3之间长成什么样完全看运气
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    一僧画画  回复了帖子 请教间充质干细胞的培养所需生长因子的种类和终浓度 273天前
    您好,请问你也在养间充质干细胞吗,是养人的还是小鼠的?我最近在养小鼠的原代间充质干细胞,但是养到第三代去流式鉴定,结果并不是很好细胞纯度很低,能不能请教一下你分离提纯的方法啊
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    一僧画画  回复了帖子 请教间充质干细胞的培养所需生长因子的种类和终浓度 273天前
    您好,请教一下您添加过bFGF养间充质干细胞吗?效果怎么样,能不能稳定传代,感谢
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    一僧画画  悬赏5丁当求助 280天前

    小鼠MSC细胞培养

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